细胞培养 第一章 组织培养技术的基本理论知识.ppt

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1、组织细胞培养技术主讲：周晓霞第一章细胞培养的基本理论知识组织培养工作开始于20世纪初，Harrison(1907)最早对两栖类胚胎的神经管组织进行了悬滴培养-哈里森悬滴培养法真正开创大规模细胞培养工作是在20世纪40年代，W.Earle和R.Dulbecco设计出了细胞培养液配方，并开始了单细胞的悬液培养，细胞培养工作才得到广泛发展。细胞培养始传我国是20世纪30年代。至50年代以后，组织培养已在我国逐步开展起来组织细胞培养的诞生和发展简史第一节细胞培养基本概念一、细胞培养(cellculture)基本概念：

2、细胞培养是指从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。体外培养细胞培养（InVitro）组织培养器官培养不分细胞培养(Cellculture)：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长。组织培养（TissueCulture）其本意是指从体内取出组织，摹拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。注：组织培养和细胞培养并无严格区别！器官培养（QrganCulture）,指的是

3、应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。细胞培养技术在遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学、分子生物学等领域已得到广泛的应用。多莉克隆猴单克隆抗体制备过程优点：1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动等二、细胞培养的优点与缺点2.可控制：选择对象：均一性、重复性哪一种：类型：上皮？间质？性质：正常？肿瘤？阶段：调节条件：物理、化学、生物等因素可控研究方法：可采用各种研究技术、记录方法3.应用广：学科多，对象广。4

4、.较经济：可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象缺点：虽然现在人工模拟体内环境的技术已经很高,但人工所模拟的条件与体内实际仍不完全相同。当细胞被置于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中久了，必然发生变化。１.与体内主要不同相对孤立、相对单一，缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。2.主要表现失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显，细胞趋向单一化；3.提示要正确认识体外培养细胞：是一种特定条件下生长的细胞群体。第二节培养物的生长生物学一、体外培养细胞的生长类型按生长方

5、式分为二型粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。粘附型细胞：粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长。细胞在体内、外的粘附方式存在差异：体内：粘附是全方位，外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时明显不同按照培养细胞的主要形态，可分为以下类型：(1)上皮型细胞(2)成纤维型细胞(3)游走型细

6、胞(4)多形型细胞(1)上皮型细胞(2)成纤维型细胞(3)游走型细胞(4)多形型细胞1234上皮样细胞型名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于来源：来源于外胚层，内胚层细胞（个别例外）如：皮肤及其衍生物消化道，乳腺，肺泡，上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动成纤维细胞样细胞名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，形态

7、：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核生长特点排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞游走型细胞具有类似巨噬细胞样的特征。经常处于较活跃的变形及游走状态，因此外形不规则且不断变化。当细胞密度增大相互连接成片时，游走受限，形状上类似上皮型细胞或成纤维细胞型的细胞。表现这种形态的细胞主要是具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞，如颗粒性白细胞、淋巴细胞、单核细

8、胞、巨噬细胞、肝枯否细胞(Kupffercell)以及某些肿瘤细胞等。多形型细胞多形型细胞是一些形态上不规则的细胞，但它不像成纤维细胞型的细胞那样，不规则形态由宽扁的胞质突起所致。其细胞一般分胞体和胞突两部分。胞突为细长形，似丝状伪足。胞体虽略呈多角形，但没有成纤维细胞型那样不规则。体外培养中呈现多形型的细胞最常见的类型是神经元和神经胶质细胞。注意：细胞形态并非固定不变，可随培养条件、生长时期、细胞