植物组织培养郑永娟 第一章植物组织培养的基本技术

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1、第1章植物组织培养的基本技术第一节实验室的设计一、植物组织培养实验室设计二、设备和仪器三、玻璃器皿及用具四、培养条件主要内容一、植物组织培养实验室设计准备间缓冲室无菌室培养室实验室设计在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作目的和规模以及需要哪些最基本的设备和条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模：1.以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产影响效率。2.在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到

2、无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。。准备室缓冲间培养室接种室准备室主要工作：完成完成各种器具的洗涤、干燥、各种药品贮备、称量、溶解、配制、培养基分装、培养基的灭菌等。主要设备：水池、工作台、高压灭菌锅、烘箱、药品柜、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器.缓冲室具体要求和工作：面积5m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，以照射灭菌。无菌室(也叫接种室，操作室)主要工作：用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质

3、体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备：紫外光源、超净工作台、显微镜、解剖镜、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。具体要求：接种室宜小不宜大，一般7～8平方米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。培养室主要工作：将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利

4、用空间和节省能源为原则。具体要求：周围墙壁要求有绝热防火的性能。培养室温度一般保持在20—27℃左右，安装空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h。主要设备：培养架、空调机、除湿机、摇床、培养箱、紫外光源等。二、设备、仪器(一)大型设备和仪器大多由铝合金制成，一般设5-7层，最低一层离地高约2Ocm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高2左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采

5、用40W日光灯，长1.3m，宽度一般为60cm。培养架用于植物材料的培养，其内有温度感受器，控制箱内温度到所调指标。生化培养箱还配有光照装置。恒温培养箱超净工作台用于培养物的无菌操作（由鼓风机、滤板、操作台、紫外灯和照明灯组成）。超净台分水平式和垂直式二种型号用于干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌和测定干物重.用于干燥需保持80-100℃；进行干热灭菌需保持150℃，达1-3h；若测定干物重，则温度应控制在80℃烘干至完全干燥为止。烘箱高压灭菌锅类型：手提式高压灭菌锅立式高压灭菌锅作用：培养基、水和各种器皿的消毒种类较多，用于分离微茎尖可采用双筒实体

6、解剖镜。解剖镜上带有照相装置，根据需要随时对所需材料进行摄影记录。作用：用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等药品精确度0．0001g。电子天平作用：测定培养基及酶制剂的ｐＨ值酸度计作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。冰箱空调机一般要保持在23—27℃左右，具备产热装置，并安装吊式或立式空调机。(二）小型用品1．镊子类(forceps)常应用医疗上的镊子。根据操作需要有各种类型2．剪刀类(scissors)可采用医疗五官科用的中型剪刀。主要用于切断茎段、叶片等。也可以用弯形剪刀，由于其头部弯曲，可以深入到瓶口中进行剪切。3.解剖

7、刀:切割较小材料和分离茎尖分生组织时，可用解剖刀。刀片要经常调换，使之保持锋利状态，否则切割时会造成挤压，引起周围细胞组织大量死亡，影响培养效果。4.解剖针:解剖针可深入到培养瓶中，转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶，可以自制。5.接种盘:组培瓶（玻璃）---要求透光度好，能耐高压高温,以试管、三角瓶、培养皿等使用较多。三角锥瓶---适用于各种培养（如固体培养、液体培养、大规模培养或一般培养）。培养皿---适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。试管---适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用。三、玻璃器皿及用具在组织培养中配

8、制培养基，贮藏母液，材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器。包括各种型号的烧杯、量筒、移液管、