植物组织培养教学课件 郑永娟 第二章 试管苗快速繁殖 .ppt

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1、第2章植物快速繁殖技术2.1试管苗快速繁殖意义和一般程序2.1.1试管苗快速繁殖意义试管苗快速繁殖，是指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。试管苗快速繁殖是植物组织培养技术在农业生产中应用最广泛、产生经济效益最大的研究领域，涉及的植物种类繁多，技术日益成熟并程序化。2.1.2试管苗快速繁殖的一般程序一般选择根、茎、叶器官为培养材料进行培养、壮苗与生根培养、试管苗驯化与移栽几个环节。①研究根系生理代谢的优良实验体系②研究营养吸收、生长和代谢的变化规律③建立快

2、速生长的根无性系④进行诱变育种2.2器官培养2.2.1根的培养2.2.1.1根无性繁殖性的建立根无性繁殖系1.2cm接后1周侧根反复转接无菌种子2.2.1.2培养多为无机离子浓度低的怀特培养基。也可用2／3MS或1／2MS、B5培养基注：离体根生长要求提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。培养温度25－27℃，暗光培养。概念：切取茎的先端或茎尖分生组织进行无菌培养。意义：微茎尖培养可获得脱毒苗；茎尖培养技术简单，操作方便，易成活，成苗时间短，加快繁殖。2.2.

3、2茎尖培养类型：根据培养目的和取材大小分为：微茎尖培养;普通茎尖培养茎尖培养的类型普通茎尖指几毫米到几十毫米的芽尖及侧芽。微茎尖为0.3-0.5mm取材材料处理及消毒培养茎尖培养的方法接　种①直接取材：在生长旺盛、枝条健壮、无病的母株上选生长不久、杂菌污染少的顶梢（1－2cm）（取前可喷杀菌药，可顶芽或侧芽）。②从试管苗获取。2.2.2.1取材取1-2㎝顶梢①顶梢切割成0.5-1.0cm的茎尖（除叶,剥去休眠芽的鳞片）②茎尖流水冲洗2-4h③75%酒精迅速漂洗30s④0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液消毒

4、5-8min(取自老枝条上的可适当延长时间）2.2.2.2材料处理及消毒接前可再剥去一些叶片。然后随切随接，动作迅速。亦可将切下茎尖材料在1-5%VC液中浸一下。2.2.2.3接种培养基①基本培养基：MS、White、B5、Heller。②蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。③激素和有机添加物有明显影响。但激素浓度以0.1mg/L为宜，不要太高。2.2.2.4培养培养条件①光强：1000－3000lx；光照时间：16h。②温度：25℃左右③昼夜温差有或无，以植物或培养过程来定④干燥季节注意保湿。2.2.3茎段的

5、培养2.2.3.1材料选择与处理嫩枝去叶，剪3-4cm长水冲洗1-3h,75%酒精30-60s，0.1%升汞3-8min(饱和漂白粉液10-20min，无菌水冲洗数次。2.2.3.2接种与培养培养基：MS腋芽增殖效果：BAKT、ZT，生长素改善苗生长，GA促芽伸长。注意激素配比。继代增殖途径：促腋芽快速生长；诱导形成不定芽。1.成苗途径与意义2.材料选择与消毒3.接种4.培养2.2.3叶的培养幼嫩叶片流水冲洗70-75%酒精漂洗10s饱和漂白粉液浸3-15min（或在0.1%升汞液5-8min）无菌水冲洗多

6、次后，用无菌滤纸吸干水分2.2.3.1材料选择与灭菌上表皮朝上接种培养基。最好带叶脉，注意极性2.2.3.2接种外植体大小：5×5mm薄片培养基：MS、B5、White、N6；蔗糖3%；2.4－D利于愈伤组织形成，NAA抑制芽形成，利于根发生，KT、6BA利于芽形成。培养条件：25－28℃，10－14h光照，1500-3000lx（不定芽分化和生长再强些）。2.2.3.3培养2.2.4.4植株再生途径直接产生不定芽形成愈伤组织形成胚状体其他途径2.3壮苗和生根培养2.3.1试管苗的壮苗培养较高浓度的生长素与

7、较低浓度的细胞分裂素组合有利于形成壮苗.在生产实际中，增殖系数控制在3.0-5.0时可实现增殖和壮苗的双重目的。另外，改善培养室环境条件，如增加光照强度、降低湿度等对培养壮苗也有一定帮助。2.3.2试管苗的生根培养生根培养基：1／2或1／4MS基本培养基；不加或少加CTK，适量添加NAA；糖浓度1-1.5%。培养条件：增加光强，达3000-10000lx。2.3.2.1生根方法与途径将新梢基部浸入50ppm或100ppmIBA溶液中处理4-8h；在含有生长素的培养基中培养4-6d直接移入含有生长素的生根培养

8、基中。容易生根的植物，延长在增殖培养基中的培养时间即可生根；适当降低增殖倍率，减少细胞分裂素的用量，即可增殖又可生根；对易生根植物，切割粗壮的嫩枝用生长素溶液浸醮处理后在营养钵中直接生根，此方法省去了生根阶段，但只适于一些容易生根的植物。2.3.2.2影响试管苗生根的因素植物材料基本培养基植物生长调节剂培养条件其它物质2.4试管苗的驯化与移载试管苗生态环境与自然环境的差异试管苗的特点试管苗的驯化试管苗的移栽2.4