植物组织培养的基本技术

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1、第二章植物组织培养的基本技术1书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏一、植物组织培养实验室的结构及设计要求:完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。但从功能上至少包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分,并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。第一节实验室结构、仪器设备及操作技术2书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏(一)化学实验室(准备室):1.主要功能:用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整

2、理等工作。3书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏2.主要仪器设备及用品:冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿(烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等)及培养基分装用品等。4书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏百分之一天平千分之一天平万分之一天平5书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏各种型号的高压灭菌锅6书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏移液器7书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专

3、业分享,敬请收藏(二)接种室(无菌操作室):1、功能:植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。接种室要求保持洁净,与化学实验室之间应设置缓冲室。8书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏2、仪器设备及用品:超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具(各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等)等。9书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏超净工作台10书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏(三)培养室:1、功能:主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度

4、、光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。11书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏2、仪器设备及用品:培养架及灯管、摇床(振荡器)、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、温湿度计灯等。12书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏培养架13书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏光照培养箱14书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏恒温振荡器多用振荡器15书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏(四)细胞学实验室:1、功能:主要用于培养材料的显微观察及照相等。16书山有路勤为径

5、●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏2、仪式设备及用品:体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。17书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏体视显微镜普通光学显微镜倒置显微镜倒置荧光显微镜18书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏二、实验室基本操作:(一)洗涤:1.普通器皿:采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。2.难清洗器皿及移液管等:用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡,最后清水冲洗,或用超声波仪清洗。19书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分

6、享,敬请收藏(二)灭菌:1、器具灭菌:培养皿、解剖刀、镊子等用品。(1)干热灭菌:铝箔包好后,放于恒温干燥箱内,150℃保温2小时,成本较高。(2)高压蒸汽灭菌:高压蒸汽灭菌锅内120℃15-20分钟。(3)灼烧灭菌:接种时,解剖刀及镊子等浸入95%乙醇,然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。20书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏2、培养基灭菌:采用高压蒸汽灭菌。120℃15-20分钟。培养基体积越大,灭菌时间越长。3、不耐高温化合物:采用过滤灭菌,如IAA等。21书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏4、外植体的表面

7、灭菌:采用70-75%乙醇(10-30秒)、有效氯1%的次氯酸钠(5-30分钟)、0.1-0.2%的氯化汞(2-15分钟)等。杀菌剂中加入几滴吐温-20或80(Tween-20或80)效果较好。22书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏23书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏(三)无菌操作:1、保持接种室的无污染环境,定期熏蒸或喷雾处理,进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟,关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。2、保持超净工作台的洁净:接种前用70%乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾,操作前,将手和手臂用

8、70%乙醇消毒,所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。24书山有路勤为径●▂●学海无涯苦作舟专业分享,敬请收藏3、点燃酒精灯,进行操作,接种材料前后

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