植物细胞组织培养的基本技术(总结版)

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1、本章主要内容l商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备l培养基及其配制l外植体的选择与培养l试管苗的驯化与移载第一节商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备l培养皿的清洗；l培养基的配制、分装和高压灭菌；l无菌操作——材料的表面灭菌和接种；l将培养物放到培养室培养；l试管苗的驯化、移栽和初期管理。(一)、洗涤室(cleaningroom)l洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。l室内配备：l大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。l备有塑料筐，用于运输培养器皿。l备有干燥架，用于放置干燥涮

2、净的培养器皿。(二)、准备室(repairingroom)l完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。准备室要求明亮、通风。l如果房间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。(三)、缓冲室l进入无菌室前要在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。l应当在此室内安装灭菌用的紫外灯。控制无菌室及培养室的配电板等。(四)、无菌操作室(transferingroom)l接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件

3、的好坏对组织培养成功与否起重要作用。l配置：l在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般7-8m2，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。l接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。(五)、培养室(culturingroom)l培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。l设计原则：l充分利用空间和节省l能源l高度比培养架略

4、高为l宜l周围墙壁要求有绝热防火的性能。(五)、培养室(culturingroom)l培养架大多由金属制成。l规格：l一般设5层，最低一层离地高约10cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长1.3m，30W的长1m，宽度一般为60cm。l培养室最重要的因子是温度，一般保持在20-27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70％-80％为好，可安装加

5、湿器。l控制日光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h。也有的需要连续照明。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。(六)、驯化室l驯化室要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、光照调节装置、通风口以及必要的杀菌剂。(七)、温室l应配有空调机、通风口、加湿器、恒温恒湿控制装置、喷雾装置、光照调节装置以及必要的杀菌杀虫装置及相应药剂。二、仪器设备和器皿用具l常见仪器设备l1、超净台l2、无菌箱l3、空调机l4、除湿机l5、恒温箱l6、

6、烘箱l7、高压灭菌锅l8、冰箱l9、电子分析天平和托盘天平l10、显微镜及解剖镜l11、水浴锅l12、摇床与转床l13、磁力搅拌器l14、电蒸馏水器l15、酸度计l16、离心机1、超净台和无菌箱l1、超净台，优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机10分钟即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。l2、无菌箱，在投资少的情况下，可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制，准备时间长，工作效率低。工作原理l超

7、净台功率在145-260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于0．3um的尘埃、细菌和真菌孢子等，最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟24-30m，这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。l根据风幕形成的方式，超净台可分为水平式和垂直式二种型号。（二）各类玻璃器皿1、培养器皿2、分注器3、离心管4、刻度移液管5、细

8、菌过滤器6、实验器皿1、培养器皿l1、培养器皿：在组织培养中配制培养基和进行培养需大量的玻璃器皿。要求由碱性溶解度小的硬质玻璃制成，以保证长期贮存药品及培养的效果；培养用的还要求