针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca~（2＋）]_i的影响.pdf

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1、天津中医药2012年4月第29卷第2期140TianjinJournalofTraditionalChineseMedicineApr．2012。Vo1．29No．2·针灸与推拿·针刺对局灶陛脑缺血大鼠海马神经元细胞【Ca】的影响冰杨沙，沈燕，孙云浩，王舒(天津中医药大学第一附属医院针灸研究所，国家中医药管理局脑病针刺疗法重点研究室天津市针灸学重点实验室，天津300193)摘要：【目的】研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca浓度[Ca“]及醒脑开窍针刺对其影响，探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。【方法】建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(McA0)模型，采用

2、醒脑开窍针刺法治疗，采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CAI区锥体细胞fca1_在不同时间点的变化。[结果】与正常组大鼠相比，模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca“】；(以细胞内ca相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血1h时升高，持续升高至缺血24h时(P0．05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组【caz+]i比较，无统计学意义(尸>0．05)。在相应时间点，醒脑开窍针刺组【caz+】{低于模型组(P<0．叭)。【结论】急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[ca2+1随缺血时间

3、的延长而持续升高，提示细胞内钙超载；醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的fca2+]。，提示在缺血后针刺治疗效果越早越好，为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。关键词：“醒脑开窍”针刺法；局灶性脑缺血；海马CA1神经细胞；[Ca；钙超载；激光扫描共聚焦显微镜中图分类号：R246文献标识码：A文章编号：1672—1519(2012)02-0140-05脑血管病是神经科的常见病和多发病，是目前Hochest33258(Sigma公司，美国)，Ca荧光助染剂人类疾病三大死亡原因之一，并且是最主要的致残PluronicF一127(Biotiuln公司，美国)。原因。神

4、经元内Caz+超载是缺血性脑损伤的关键因1．1．2实验动物选择健康雄性SD大鼠(Ⅱ级)，体素『11。“醒脑开窍”针刺法治疗脑血管病应用30多年质量200．--250g，由北京大学医学实验动物中心提供。来取得了显著I临床疗效。基础研究发现，醒脑开窍1．2方法法可促进局灶性脑缺血(MCAO)大鼠缺血侧大脑1．2．1分组70只造模成功的SD大鼠，按随机数循环的建立I21，其机制通过调节血管内皮生长因子字表法随机分为正常对照组，假手术组5只，模型(VECF)／Flt一1、血管紧张素(Ang)／Tie一2的表达[31，还组、非穴位针刺组、传统针刺组、醒脑开窍针刺组各有研究发现醒脑

5、开窍法可通过泛素蛋白酶体通路15只，后4组分设缺血1、6、24h组，共计3个观起脑保护作用，本实验选择线栓法制作大脑中动察时点。脉阻塞的MCAO大鼠模型，利用激光共聚焦扫描显1．2．2模型制作参照Longat~等人报道的线栓法，微镜(LSCM)技术，观察海马CA1区活体脑片上针阻断大鼠一侧的大脑中动脉造成MCAO模型。正常刺对缺血后细胞内的Caz+含量影响，进一步探讨醒对照组不进行手术处理。脑开窍针刺法对脑缺血保护的作用机制。1．2．3针刺方法根据中国针灸学会实验针灸研1材料与方法究会制定的“动物针灸穴位图谱”，醒脑开窍针刺组1．1材料选“醒脑开窍”主穴人中、内关(双)

6、；传统针刺组选1,1．1仪器与试剂Tcs—NT型激光扫描共聚焦患侧曲池、足三里穴；非穴位针刺组予针刺双侧腋显微镜(Leica公司，德国)，Caz+荧光探针Fluo一3／AM中线下3mm各一非穴点及尾骨尖旁开3mm一非(MolecularProbes公司，美国)，细胞核荧光探针穴点进行针刺。具体操作：直刺内关穴，动物前肢内侧距腕横纹上3～4mm尺桡骨缝间；人中穴在鼻中基金项目：国家自然科学基金资助项目(30873304)。膈下部，在唇裂正中，鼻尖下血1mm处，向上斜刺作者简介：杨沙(1982一)，女，研究实习员，主要从事针灸基础研究工作。1mm；直刺曲池穴，在桡骨近端，肘

7、关节外侧前方的通讯作者：王舒。凹陷中；直刺足三里穴，位于膝关节下外侧，腓骨小2012年4月第29卷第2期天津中医药Apr．2012，Vo1．29No．2TianjinJournalofTraditionalChineseMedicine141头下5mm。3组针刺组均采用电针刺激10min，电量的变化正常对照组与假手术组相比差异无统针强度3mA，频率2Hz。缺血1、6、24h组在造模计学意义(0．05o与正常对照组相比，模型组脑缺成功后即刻各针刺1次；缺血24h组12h后针刺血1h差异有统计学意义(P<0．05)，脑缺血6、24h1次。差异