《葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马 CA1区神经元损伤的影响及其机制》.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Jun；50(6)·723·◇基础医学研究◇葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤的影响及其机制尹雪莉，桂丽，李珍摘要目的探讨葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大非常重要的作用，其中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一3鼠海马CA1区神经元损伤的保护作用及其机制。方法雄(Caspase一3)为凋亡的最终执行分子，半胱氨酸天冬性sD大鼠30只，随机均等分为假手术组、模型组、葛根素预氨酸蛋白酶．9(Caspase-9)是内源性凋亡途径的重要处理组。采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉血供，60min后拔

2、启动酶I4J。该实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注出栓线造成局部脑缺血再灌注损伤。葛根素预处理组在缺模型，研究葛根素预处理对海马CA1区神经元损伤血前1h腹腔注射葛根素(100ms／kg)。脑缺血再灌注后第及对促凋亡基因Caspase一3和Caspase一9表达的影5天，HE染色法观察海马CA1区神经元的组织形态学变化，响；以期能够对葛根素的神经保护作用进行初步探免疫组化法检测海马CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一3讨，从而为临床上缺血性脑损伤方面疾病的治疗提(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶_9(Caspase-9)的表达。结果HE染色结果显示，与模型组相比较，葛根素预处供一定

3、的理论基础和科学依据。理明显减少脑缺血再灌注引起的海马CA1区神经元损伤(P1材料与方法<0．05)；免疫组化结果显示，与模型组相比，葛根素预处理使海马CA1区Caspase．3、Caspase-9的表达明显降低(P<1．1材料0．05)。结论缺血前1h葛根素预处理对局灶性脑缺血大1．1．1实验动物雄性SD大鼠30只，220～250鼠海马CA1区神经元损伤有保护作用，其主要机制可能与g，清洁级，购自安徽医科大学实验动物中心。大鼠抑制凋亡相关蛋白Caspase一3、Caspase-9的表达有关。在使用过程中严格遵循安徽省实验动物管理条例，关键词葛根素；缺血再灌注损伤；神经保护；Caspa

4、se-3；并且尽可能减少大鼠的痛苦及使用数量。Caspase-91．1．2主要试剂和仪器葛根素注射液购自陕西中图分类号R33—33；R932安康正大制药厂；兔抗鼠Caspase-3、Caspase-9多克文献标志码A文章编号1000—1492(2015)06—0723—04隆抗体均购自武汉博士德公司；德国徕卡石蜡切片机购自湖北徕克医疗仪器有限公司；光学显微镜及葛根素，一种异黄酮单体，是从中国传统中药葛其拍照分析系统购自日本尼康公司；MCAO栓线购根中提取出来的有效成分。研究¨显示葛根素有自北京沙东生物技术有限公司。改善微循环、抗氧化、清除自由基等多种药理学作1．2方法用，在临床心脑血管

5、疾病的治疗中应用广泛，但其作1．2．1实验分组与处理雄性SD大鼠随机均等用机制目前还没有完全清楚。脑缺血再灌注损伤是分为假手术组、模型组、葛根素预处理组。假手术组临床上常见的病理现象，严重危害患者的神经系统大鼠只分离血管，不插入栓线；采用线栓法将模型组功能；在缺血前进行预处理可以改善缺血性脑损伤，大鼠制备成大脑中动脉阻塞(middlecerebralartery减少细胞的凋亡及坏死。细胞凋亡是脑缺血再occlusion，MCAO)的脑缺血动物模型，60min后拔灌注损伤的重要机制，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解出栓线从而实现再灌注；葛根素预处理组大鼠在缺酶(Caspase)家族在介导细胞凋亡

6、的过程中发挥着血前1h腹腔注射葛根素注射液(100mg／kg)。1．2．2局灶性脑缺血模型的制备大鼠经1O％水2015—02—19接收合氯醛腹腔注射(300mg／kg)麻醉后，取仰卧位固基金项目：国家自然科学基金(编号：30900420)；安徽医科大学校科学研究基金(编号：2012xkj007)定于手术台上，颈部正中切口，仔细分离右侧颈总动作者单位：安徽医科大学基础医学院生理学教研室、综合实验室，脉、颈内动脉及颈外动脉，结扎颈外动脉。在颈总动合肥23oo32脉上剪一V字形小口，插入直径为0．26mm的作者简介：尹雪莉，女，博士研究生，实验师；MCAO栓线，从颈总动脉分又处进入颈内动脉，

7、轻柔李珍，女，副教授，责任作者，E-mail：lizhenS0@sina．con地插入至有轻微阻力时停止(自分叉处约20mm)，·726·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Jun；50(6)[4]YagnchiT，FujikawaH，NishizakiT。LinoleicacidderivativeDCP·一，1．LAprotectsneuronsfromoxidativestress—i