瑞舒伐他汀预处理对局灶性缺血再灌注大鼠自噬水平的影响

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1、万方数据山东大学硕士学位论文2缺血半暗带神经元及神经胶质细胞形态观察缺血再灌注(拔出线栓)90min后,采用TTC染色法测定脑梗死面积,电镜下观察缺血半暗带内神经元及神经胶质细胞形态和自噬泡数量。3细胞自噬激活定位和水平测定采用免疫荧光双标实验,观察LC.3B与NeuN、LC.3B与GFAP、LC.3B与Iba.1的双标图像,确定自噬激活位置是在神经元内还是胶质细胞内。采用免疫蛋白印迹(WesternBlot)实验检测脑缺血半暗带区域自噬体膜蛋白微管相关蛋白1轻链3A、3B(LC一3A,LC一3B)及前自噬体膜蛋白Beclinl的表达量。4数据

2、统计学分析采用医学统计学软件SPSSl9.0进行数据分析,计量资料以均数土标准差表示,多组之间的比较行单因素方差分析,期间任意两组之间的比较行LSD.t检验;计数资料以构成比或百分比表示,行卡方检验;等级资料行秩和检验;P<0.05表明差异有统计学意义。结果1模型评价空白对照组和假手术组未出现神经功能损害症状,mNSS评分均为0;MCAO模型组、瑞舒伐他汀预处理组和溶剂组均出现明显的神经功能损害症状,mNSS平均分分别为(11.2士1.26)分、(10.9士1.12)分、(11.4+1.31)分,其组间的mNSS评分有统计学差异,瑞舒伐他汀预处

3、理组明显低于其他两组(尸<0.05)。2缺血半暗带神经元及神经胶质细胞形态TTC染色后,脑梗死区域呈现苍白色,非脑梗死区域呈现红色,苍白色区域与大脑中动脉供血区域一致。就梗死面积而言,瑞舒伐他汀预处理组较MCAO模型组和溶剂组小,且差异有统计学意义(尸<0.05);MCAO模型组和溶剂组之间无统计学差异(尸>O.05)。此外,瑞舒伐他汀预处理组凋亡细胞和自噬泡数量较MCAO模型组和溶剂组少,且差异有统计学意义(尸<0.05);MCAO模型组和溶剂组之间无统计学差异(尸>O.05)。3细胞自噬激活定位和水平免疫荧光共聚焦显微镜下,LC.3B为绿色

4、荧光,NeuN为红色荧光,缺血半万方数据山东大学硕上学位论文暗带区域呈现绿色荧光和红色荧光重叠色.橙色,说明LC.3B主要定位于神经元细胞。Westernblot实验结果显示,MCAO模型组、瑞舒伐他汀预处理组和溶剂组的LC.3A,LC.3B及Beclinl蛋白表达水平明显高于空白对照组和假手术组(尸<0.05),空白对照组和假手术组之间无统计学差异(P>0.05);瑞舒伐他汀预处理组的LC.3A,LC.3B及Beclinl蛋白表达水平明显低于MCAO模型组和溶剂组(PO.05)。结论1

5、缺血缺氧性损伤能够促进缺血半暗区自噬泡和自噬溶酶体的形成,启动自噬反应,且存在细胞自噬和细胞凋亡共存的特点。2自噬因子LC主要表达于神经元,星形胶质细胞及小胶质细胞也有少量分布,合理调控三种神经细胞的自噬转导通路,均有可能起到神经保护作用。3半暗区自噬因子LC.3A、LC.3B及Beclinl的表达上调,瑞舒伐他汀能够下调LC一3A、LC.3B及Beclinl的表达,抑制神经细胞自噬,从而发挥神经保护作用,可能为其治疗缺血再灌注损伤的重要机制之一。【关键词】瑞舒伐他汀;MCAO大鼠模型;脑缺血再灌注损伤;自噬;细胞凋亡万方数据山东大学硕上学位论

6、义EffectsofrosuvastatinpretreatmentonfocalischemiaObjectivereperfusionofautophagyinratsSpecialty:NeurologyPostgraduate:MaShuangSupervisor:Prof.WangCuilanAbstractsStrokeiscurrentlytheworld’Sleadingcauseoflong—termdisability,resultinginthethirdcommoncausesofdeathinChineseurbanr

7、esidents.Accordingtostatistics,ischemicstrokemakesup85%'-'90%ofallthestroke,andtheischemiareperfusioninjuryisamajorcauseofdisability.Recentstudiesshowthatinadditiontoinflammationandoxidativestressreaction,excessiveactivationofautophagyisalsoinvolvedintheprocessofischemiarepe

8、rfusioninjury.Clinicalstudyresultsshowthatinhibitingtheexcessiveactivationo

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