瑞舒伐他汀对血管性痴呆大鼠海马凋亡与自噬的作用

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1、学校代码10459学号或申请号201412453892密级公开硕士学位论文瑞舒伐他汀对血管性痴呆大鼠海马凋亡与自噬的作用作者姓名：张勤导师姓名：陈淅泠教授学科门类：医学专业名称：神经病学培养院系：第二临床医学院完成时间：2017年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofmasterEffectsofRosuvastatinonApoptosisandAutophagyintheHippocampusofRatswithVascularDementiaByQinZhan

2、gSupervisor:Prof.XilingChenDepartmentofNeurologyTheSecondClinicalCollegeofZhengzhouUniversityApril，2017瑞舒伐他汀对血管性痴呆大鼠海马凋亡与自噬的作用研究生张勤导师陈淅泠郑州大学第二临床附属学院神经病学河南郑州450014摘要背景与目的血管性痴呆（vasculardementia，VD）是最常见的非变性病痴呆，由各种脑血管疾病诱发，占痴呆总数15%-20%，仅次于阿尔茨海默病（Alzheimer’sDisease，AD）。慢性脑低灌

3、注(Chroniccerebralhypoperfusion,CCH)被认为是脑血管病患者出现痴呆的显著危险因素，可导致脑关键部位（尤其是海马CA1区）缺血缺氧，诱发迟发性神经元损害，进而导致痴呆。因此，探讨CCH的病理生理变化有助于发现VD潜在的治疗靶点。在该病理变化中脑神经元大量丢失，凋亡与自噬共存并相互作用。凋亡是细胞的一种主动性死亡方式，Bcl-2家族凋亡蛋白中Bcl-2蛋白具有抗凋亡作用，而Bax具有促凋亡作用，主要依赖于Bcl-2/Bax比值的变化对凋亡进行调控。自噬是细胞自我吞噬的过程，CCH中脑组织的自噬水平处于激活

4、状态，长期过度自噬可损害神经元，Beclin-1蛋白是目前常用的自噬发生的生物学指标。他汀类药物作为卒中后一级预防药物，它不仅具有降脂、抑制血小板聚集、稳定斑块等作用，还具有抑制凋亡、抗氧化应激、抗炎、调节自噬等作用。不同类型的他汀在不同组织中对自噬的调节作用不同。瑞舒伐他汀（rosuvastatin，ROS）目前在临床上被广泛应用，有研究发现ROS可以改善VD大鼠行为学能力，但其神经保护机制仍未明确，该机制是否与ROS对慢性脑缺血中神经元自噬与凋亡水平的调节有关，目前尚无实验证实。本研究旨在通过检测ROS对VD大鼠学习及记忆能力、

5、海马组织形态学及I凋亡与自噬水平的作用，探讨ROS对VD的保护作用及其病理机制，为临床优化用药提供实验依据。材料与方法选取SPF级雄性SD大鼠，11-12周龄，体重250-270g，随机分为4组，分别为：1.假手术+生理盐水组（Sham组）；2.假手术+瑞舒伐他汀组（Sham+ROS组）；3.VD+生理盐水组（VD组）；4.VD+瑞舒伐他汀组（VD+ROS组）。VD模型采用双侧永久性颈总动脉结扎术构建。每组大鼠术后2周开始给予相应试剂处理，瑞舒伐他汀按5mg/kg/d灌胃（按AUC推算，全身暴露量相当于人40mg/d暴露量），生理盐

6、水按等体积灌胃，每天1次，连续用药3周。给药结束后进行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变，随后取材进行HE染色观察大鼠海马CA1区形态学改变，免疫组化法观察Beclin-1及Bcl-2蛋白在CA1区的表达变化，以及WesternBlotting免疫印迹法观察海马组织Bcl-2/Bax比值变化。结果1.ROS对VD大鼠行为学的作用4组大鼠逃避潜伏期及目标象限停留时间百分比均有统计学差异（P＜0.01）。Sham组与Sham+ROS组行为学无显著差异（P＞0.01）。与前两组相比，VD组逃避潜伏期增加，目标象限停留时间百分比

7、降低（P＜0.01）。VD+ROS组较VD组逃避潜伏期缩短，目标象限停留时间百分比增加（P＜0.01）。2.ROS对VD大鼠海马CA1区组织形态学的作用Sham组及Sham+ROS组中，两组大鼠海马CA1区细胞结构完整、排列整齐，无明显神经元丢失。VD组与前两组相比，大鼠海马CA1区细胞形态结构不规则、排列疏松，胞核固缩深染、核仁消失，存在明显神经元丢失。VD+ROS组与VD组相比，上述病理学改变有明显改善。3.ROS对VD大鼠海马组织Bcl-2/Bax蛋白比值的作用各组大鼠海马组织Bcl-2/Bax比值有统计学差异（P=0.003

8、），Sham组与Sham+ROS组海马Bcl-2/Bax比值无统计学差异（P=0.966），与前两组比较，VD组海马Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.01），VD+ROS组较VD组Bcl-2/Bax比值升高（P=0.026）。4.R