电针对局灶性脑缺血模型大鼠脑内stat1阳性神经元的影响

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1、电针对局灶性脑缺血模型大鼠脑内STAT1阳性神经元的影响：于涛，许能贵，符文彬，易玮，徐振华，付雪松【摘要】目的研究脑缺血后STAT1在病灶局部的调控机制以及电针的干预影响。方法采用热凝法制成MCAO模型，采用免疫组织化学的方法检测不同时间段STAT1在病灶侧皮质、海马CA1区的调控机制以及电针的干预结果。结果模型24h组多个指标稍有增高;模型组3d组指标均有显著的增高(P<0.05)。电针组中电针2h组、电针24h与模型组无显著性差异(P>0.05);电针3d组明显低于与模型组，差异有显著性(P<0.05或P&

2、lt;0.001)。结论电针治疗可以抑制脑缺血后的STAT1水平，这可能是其治疗脑缺血、改善受损脑功能的一个重要途径。【关键词】电针;脑缺血;STAT1　在脑缺血引起的局部炎性反应中，JAKs-STATs家族的信号传导对病灶区细胞凋亡过程起着重要的作用，其中STAT1激活可能与细胞凋亡相关[1]。因此，研究脑内STAT1在脑缺血后的调控机制以及电针的干预作用，对了解电针治疗对脑缺血的内在干预机制有着一定的意义。　　1动物和材料　　1.1动物分组广州中医药大学动物实验中心SPF级SD大鼠90只[合格证号NO031878，许可证号SY

3、XK(粤)，2008-0020]，均为雄性，体质量(220±20)g。由随机数字表法随机分为假手术组(J组)、模型组(M组)和电针组(Z组)，每组又分为2h，24h，3d3个时间段组。　　1.2试剂和材料兔抗STAT1一抗(博士德公司出品)，免疫组化染色试剂盒(即用型SABC)(博士德公司出品)，Leica冰冻切片机(德国Leica公司)，Leica倒置显微镜及图像处理系统(德国Leica公司)。　　2方法　　2.1制模方法采用的热凝闭大脑中动脉致局灶性脑缺血MCOA模型[2]。假手术者只暴露大鼠大脑中动脉，不予凝闭。　　2.2电

4、针干预方法电针组选取督脉经穴百会(GV20)、大椎(GV14)两穴，其定位参照大鼠的常用针灸穴位[3]。以1寸毫针向后斜刺百会0.5寸，直刺大椎0.3寸，两穴接上电针，用疏密波，5～10次/s，强度以大鼠安静耐受为度，约2～3V，时间30min，1d/次。Z2h组在手术后1h进行电针治疗，电针30min，治疗后30min后处死灌流固定、Z24h组在造模后24h后处理;Z3d组在同一时间治疗3d后处理。假手术组和模型组均在相应的时间进行处理。　　2.3实验方法每组大鼠在干预结束后用10%水合氯醛麻醉，常规灌注固定。第2天，取脑组织进

5、行冠状冰冻切片，片厚40μm。收集于0.1MPB(pH7.4)中备用。在实验中，因麻醉意外，M24h组死亡2只，M3d组死亡1只，Z2h组死亡1只。STAT1免疫组织化学方法将严格按说明书操作。对照实验以正常羊血清和PBS代替一抗，同步进行上述免疫组织化学染色，结果为阴性。　　2.4图像分析及统计学处理确定标记的部位，在目镜10×和物镜40×的视野下，应用Leica-Q2h在3个指标方面与J2h无明显差异(P>0.05)，M24h组较M2h组在3个指标的数值上均有一定程度地升高，但两者相较均无明显差异(P>0.05)，

6、与J24h比较亦然;M3d各数值较前两组均有明显的升高，与M2h和J3d之间比较在3指标上均有显著性差异(P<0.001);电针组方面：3指标Z2h与J2h、M2h以及Z24h与J24h、M24h间均无显著性差异(P>0.05);Z3d与J3d间也均无显著性差异(P>0.05)，但与M3d比较差异均有显著性(P<0.001)。表1病灶侧皮质区STAT1免疫阳性细胞形态学参数表2病灶侧海马CA1区STAT1免疫阳性细胞形态学参数表2的数值和表1基本一致，假手术组3个组在STAT1阳性细胞数、平均截面积、平均光

7、密度值3个指组间均无显著性差异(P>0.05);模型组中M24h组开始有一定程度地升高，M3d明显升高，与J3d比较差异有显著性(P<0.001);电针组方面：Z24h与Z3d均与模型组低，其中Z3d与M3d比较差异均有显著性(P<0.01至P<0.001)。　　4讨论　　现已证实脑缺血及再灌注损伤可使JAKs-STATs信号通路激活。其中STAT1激活可能与细胞凋亡相关[1]。有人报道，大脑皮质局部短暂缺血后，同侧皮质STAT1在24h内未见明显表达增加，第4天开始显著增加，7d达高峰，持续15d[4]。

8、李文涛等[5]采用免疫组织化学和激光共聚焦方法研究发现STAT1免疫反应阳性细胞在正常和假手术大鼠大脑皮质及海马只有少量表达，而在慢性脑缺血30d组大鼠大脑皮质及海马STAT1蛋白阳性细胞广泛分布于皮层及海马,细胞数量明显多于非缺血组,差异有统计学