电针促进局灶性脑缺血大鼠脑内血管新生并减轻神经元损伤的研究

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1、湖北中医药大学博士学位论文电针促进局灶性脑缺血大鼠脑内血管新生并减轻神经元损伤的研究姓名：张晓明申请学位级别：博士专业：针灸推拿学指导教师：陈邦国20120530摘要目的：脑卒中(Stroke)是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病，又叫脑血管意外，可分为缺血性和出血性。脑卒中患者中约85％为缺血性脑卒中，其发病率高，预后较差，已成为中老年人第一致残和前三位致死原因之一，严重危及人类的健康。中医学认为，缺血性脑卒中的病机概括为虚、火、风、痰、气、血六端，此六端在一定条件下，相互作用而致突然发病。而针刺作为中医有代表性的非药物治疗方法，具有操作简便、安全的特点，符合现代社会对健康的追求，

2、且针刺在治疗缺血性脑血管疾病中的确切作用已为众多的临床实践所证实。根据临床实践及血管新生在脑缺血恢复中的重要作用，我们拟研究血管新生是否参与了电针改善脑缺血后神经功能缺损的治疗作用以及电针促进血管新生的可能机制。这将为研究电针促血管新生，发挥脑保护作用提供一定的实验依据。方法：清洁级雄性sD大鼠随机分为电针组、模型组、假手术组，电针组与模型组大鼠采用线栓法栓塞大脑中动脉60min后恢复血流，电针组在再灌注2h后开始电针刺激(百会、水沟、足三里，疏密波，频率2Hz／15Hz，强度约lmA)30min，每隔12h重复刺激1次。再灌注24h后，采用实时荧光定量PCR法观察电针对缺血再灌注大

3、鼠脑组织VEGFmRNA的影响；再灌注48h后，采用免疫印迹法分析电针对缺血区VEGF蛋白的影响，免疫组织化学法观察电针对缺血区促血管新生相关因子的影响；再灌注72h后，观察电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为学障碍的影响，电针对缺血区微血管密度的影响，并用TTC法测量脑梗死体积，原位末端标记法观察缺血区细胞凋亡情况，并采用免疫印迹法观察电针对凋亡相关蛋白表达的影响。结果：(1)脑缺血再灌注24h、48h、72h后，随再灌注时间的延长，模型组和电针组大鼠神经体征损伤评分逐渐降低；且各时间点电针组较模型组大鼠神经体征损伤评分明显降低，统计学处理有显著性差异(F<0．05，尸<0．01)；病

4、理形态学观察，可见假手术组大鼠细胞排列整齐，无水肿，未见炎性细胞浸润；模型组可见缺血坏死区结构疏松，间质水肿，大量细胞坏死，核仁消失，排列紊乱；电针治疗组缺血坏死区结构较假手术组疏松，但间质水肿不明显，坏死细胞数量较模型组明显减少，排列较模型组规则。(2)脑梗死体积测定，假手术组大鼠脑组织染色呈鲜红色，未见白色缺血梗死区；模型组大鼠可见缺血侧大脑中动脉供血区脑组织大部分区域呈白色梗死区；电针治疗组大鼠缺血侧大脑中动脉供血区脑组织仅有较少区域呈白色，脑缺血梗死范围较模型组明显减少(尸

5、组大鼠缺血区微血管密度显著增加，统计学处理有显著性差异(P<0．05)．(3)数据分析表明假手术组大鼠几乎未见VEGFmRNA的表达，模型组可见一定量VEGFmRNA表达，而电针组VEGFmRNA的表达与模型组比较明显增强(尸<0．01)；为进一步观察电针对缺血再灌注大鼠脑组织血管新生的影响，我们采用免疫印法检测了各组大鼠脑组织中VEGF蛋白的水平，结果显示，与模型组相比，脑缺血再灌注大鼠经电针治疗后，脑组织中VEGF蛋白水平明显增高(尸

6、处理有显著性差异(尸<0．05)；假手术组未见或少见Ang-1表达；模型组大鼠可见脑缺血区Ang-1表达，而电针组较模型组大鼠缺血区Ang-1表达显著增加，统计学处理有显著性差异(尸<0．05)。(5)假手术组未见或少见凋亡细胞，模型组缺血区可见较多凋亡细胞，主要见于梗死灶周围；电针组凋亡细胞数目明显减少，与模型组比较差异显著(尸

7、了各组大n鼠脑组织中促凋亡蛋白Bax的水平，如所示，电针治疗组大鼠脑组织中Bax水平较模型组明显降低(尸<0．05)。结论：电针可能通过促进缺血区VEGFmRNA的表达，促使VEGF蛋白表达增加，并通过G-CSF、Ang-1等促血管新生因子的协同作用，增加缺血区微血管密度，发挥促血管新生效应；此外，电针可能通过调节Bax／Bcl-2等凋亡相关蛋白来减少缺血区细胞凋亡数，从而减轻缺血区病理形态学损伤，缩小脑梗死体积。多方面效应协同作用，有效减轻了脑缺血再灌注