电针动员局灶脑缺血2f再灌注大鼠骨髓内皮祖细胞归巢并参与脑内血管再生的机制分析

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1、万方数据电针动员局灶脑缺血／再灌注大鼠骨髓内皮祖细胞归巢并参与脑内血管再生的机制研究1摘要缺血性脑血管病是具有高发病率、高致死率、高致残率的疾病。脑缺血后脑内血管再生、脑循环结构与功能的重建是神经网络结构和功能重建的基础、前提及保障，故深入研究脑缺血后脑内血管再生具有非常重要的意义。脑缺血后的血管重建仅靠脑内内皮细胞(endothelialcells，ECs)增殖修复远远不够，而通过内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)的增殖、迁移、分化形成新生血管过程，无需依赖原有的血管系统，是目前血

2、管再生治疗的新策略。以往在EPCs对血管再生作用的研究中多采取细胞移植的手段，较少单独从机体整体水平进行研究，而机体内源性EPCs在脑缺血损伤后能有效地促进血管再生，且外源性EPCs的运用目前仍存在多种亟待解决的问题，故在体研究内源性EPCs的动员、迁移、归巢及其促血管再生作用十分必要。磷脂酰肌醇一3激酶(phosphatidylinosit01．3一kinase，P13K)／蛋白激酶B(proteinkinaseB，PKB／AKT)通路及SDF．10t／CXCR4轴与骨髓EPCs动员密切相关，但在机体整体水平上的调控等方面

3、的研究相对较少。针刺作为祖国传统1重庆市卫生局中医药科研重点项目(ZY20131027)、重庆市卫生局中医药科研项目(渝中医2005．B．24)教育部“高等学校博士学科点专项科研基金”联合资助课题(20095503110001)万方数据医学治疗脑缺血已有上千年历史，对其作用机制的研究层出不穷。研究表明，“非药物”治疗手段——电针可明显促进缺血组织的血管再生，推测电针促进脑缺血区的血管再生可能与其动员骨髓EPCs至外周血并归巢至脑缺血区促进血管再生相关，但其机制仍不清楚。本研究旨在研究穴位电针干预下局灶脑缺血／再灌注SD大鼠骨

4、髓、外周血及大脑皮质缺血区CD34WEGFR2+EPCs、CD34+EPCs数量变化的时空规律及SDF．10t、p-AKT的表达变化规律，以期深入探讨穴位电针促进脑缺血后大脑皮质缺血区血管再生的机制，明确其机制是否与促进骨髓、外周血p-AKT、SDF．10【表达上调，动员骨髓EPCs归巢参与脑内血管再生相关。目的：1．探讨电针对局灶脑缺血／再灌注大鼠神经功能恢复的影响；2．探讨电针干预对局灶脑缺血／再灌注大鼠骨髓、外周血CD34+VEGFR2+EPCs、CD34+EPCs数量的影响；3．探讨电针对局灶脑缺血／再灌注大鼠骨髓、

5、外周血、大脑皮质缺血区SDF一1仅表达的影响；4．探讨电针对局灶脑缺血／再灌注大鼠骨髓AKT蛋白磷酸化(p-AKT)的影响；5．探讨电针对局灶脑缺血／再灌注大鼠大脑皮质缺血区EPCs源性血管表达的影响；6．探讨和证实骨髓EPCs是否可寻骨髓、外周血、缺血脑组织的SDF—lot4万方数据浓度梯度动员到外周血并归巢至缺血皮质区，促进脑内缺血区血管再生；7．深入探讨电针动员“脑外内源性成血管因素”(骨髓EPCs)促进局灶脑缺血／再灌注后脑内血管再生的机制。方法：线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血／再灌注模型，255只SD大鼠随机分为假手

6、术组(Sham组)、模型组(I瓜组)、电针组(ISSUE组)，并按缺血2h再灌注后的观察时相点将各组分为12h、ld、2d、3d、7d5个亚组。取大鼠“百会”穴(GV20)及左侧“四关’’穴(“合谷’’(LI4)／‘‘太冲”(LR3))为电针穴位，刺激时间为30min／d。采用改良神经功能缺损程度评分(ModifiedNeurologicalSeverityScore，mNSS)评价电针干预前后局灶脑缺血／再灌注大鼠神经功能恢复情况，流式细胞术检测骨髓、外周血CD34+EPCs及CD34ⅦGFRTEPCs的数量变化，采用Re

7、al．timePCR及Westernblot检测骨髓、外周血、大脑皮质缺血区SDF．10mRNA和蛋白的表达变化及骨髓p-AKT蛋白的表达情况，免疫荧光双标观察大脑皮质缺血区CD34+VEGFR2+血管表达。结果：1．改良神经功能缺损程度评分(IIlNSS)模型组及电针组大鼠在MCAO后的12h、ld、2d、3d、7d均表现出不同程度的神经功能缺损。与模型组比较，电针12h、ld、2d时mNSS评分无明显差异(P>O．05)，电针3d(P

8、分均逐渐下降。2．电针对局灶脑缺血／再灌注大鼠外周血CD34+VEGFR2+EPCs数量的影响与假手术组比较，模型组外周血CD34+VEGFR2+EPCs数量于再灌注后12h开始增多(P