电针对局灶脑缺血再灌注大鼠外周血与骨髓内皮祖细胞数量的影响及其机制的研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠外周血与骨髓内皮祖细胞数量的影响及其机制的研究姓名：孙宏毅申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：罗勇201205电针对局灶脑缺血／再灌注大鼠外周血与骨髓内皮祖细胞数量的影响及其机制的研究1摘要缺血性脑血管病为临床常见病和多发病，因其具有较高发病率、死亡率和致残率，给个人、家庭和乃至整个社会带来了巨大的精神压力和经济负担。针灸作为我国传统医学最要组成部分，治疗脑血管病已有数千年历史。现代电针是在传统针灸的基础上逐渐发展起来，有着刺激量客观、稳定且病人容易耐受等独特的优越性，在临床上广泛应用于治疗脑卒中后遗症，能有效改善患者肢体神经功能

2、评分。电针也可抑制局灶脑缺血／再灌注时缺血神经元的凋亡，上调缺血区血管内皮生长因子表达、进而促进血管新生和抑制炎症反应，从而实现脑保护。电针通过体表穴位有效刺激激活体内保护机制，是治疗脑缺血的一种有效以及理想的非药物手段。它的作用机理是否与激活局灶脑缺血／再灌注后内源性血管生成机制中血管发生有关?这值得我们进一步探索。有研究发现，脑缺血后的血管发生与内皮祖细胞(EPCs)密切相关。在脑缺血后血管再生机制的研究中，关于电针促进脑缺血后EPCs动员、迁移和归巢形成新生血管的机制研究较少。本实验致力于研究1基金项目：教育部“高等学校博士学科点专项科研基金”联合资助课题(课题编号：2009550

3、3110001)及重庆市卫生局中医药科研项目(渝中医2005-B．24)在电针干预下局灶脑缺血／再灌注SD(Sprague-Dawley)大鼠外周血基质细胞衍生因子．1a(SDF．10t)、趋化因子受体4+(CXCR4)细胞和EPCs与骨髓EPCs数量的变化规律，探讨电针在局灶脑缺血／再灌注后对SDF．10【和EPCs的作用，从SDF．1／CXCR4轴的角度探讨电针对EPCs迁移的影响。目的1．探讨在电针干预下大鼠局灶脑缺血再灌注后，大鼠的学习记忆能力；2．探讨在电针及AMD3100干预下大鼠局灶脑缺血／再灌注后，CXCR4+细胞在外周血，EPCs在外周血和骨髓的数量变化；3．探讨在电针

4、大鼠局灶脑缺血再灌注后，SDF．10【在外周血浓度变化；4．探讨电针促进大鼠局灶脑缺血／再灌注后血管新生的机制。方法采用线栓大脑中动脉法制备局灶脑缺血再灌注模型(MCAO／R模型)，96只雄性SD大鼠，分为A和B两个大组，再将A组分为正常组(normal组)、模型组(model组)和电针组(EA组)共16只SD大鼠(n_6)，B组分为正常组(normal组)、模型组(model组)、电针组(EA组)和药物组(AⅧ3100组)共78只SD大鼠(n-6)。电针组大鼠为再灌注后1h刺激大鼠双倾旷合谷"穴(LI4)，刺激时间15min，每日1次。药物组大鼠为再灌注后lh以1．25mg／kg腹腔注

5、射AMD31001次。A组中模型组和电针组在再灌注后第3d进行水迷宫试验，检测1大鼠的学习记忆能力。B组大鼠再按局灶脑缺血2h再灌注后的观察时间点，将模型组电针组和药物分为1d、2d、3d和7d各4个亚组，每个时间点6只SD大鼠，除药物组外均采用流式细胞术检测外周血EPCs、CXCR4+细胞和骨髓EPCs占单核细胞的百分比，ELISA法检测血清中SDF—lot蛋白浓度。药物组只检测外周EPCs、CXCR4+细胞单核细胞的百分比。神经症状学评分了解局灶脑缺血／再灌注后各组大鼠神经功能缺损隋况。绮果1．神经症状学评分局灶脑缺血／再灌注大鼠再灌注后均出现不同程度的神经功能缺损，电针可有效改善神

6、经症状学评分。再灌；!：t2h、ld和3d评分略有逐渐减少趋势，但模型组与电针组比较差异无显著性(P>o．05)；随着缺血再灌注时间延长，大鼠神经功能有所恢复，再灌注7d两组比较有显著差异(Po．05)。第2d电针组与正常组比较差异，差异不具有统计学意义(P>o．05)：第3d时模型组、电针组分别与正常组比较，具有统计学意义(P

7、有统计学意义(Po．05)。(2)空间探索实验原平台游泳时间：在第6的拆除平台后，正常组和电针组较模型组在原平台象限游泳时间明显延长，差异具有统计学意义(Po．05)。穿过平台次数：正常组和电针组较模型组穿台次数明显增多，正常组较模型组比较差异具有统计学意义(P