液基薄层涂片技术在乳腺癌患者免疫细胞化学检测中的应用.pdf

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肿瘤防治研究2012年第39卷第7期·833·doi：10．3971／j．issn．10I)08578．2012．07．017临床诊断液基薄层涂片技术在乳腺癌患者免疫细胞化学检测中的应用张智慧，赵琳琳，郭会芹，潘秦镜ImmunocytochemistryAssayinBreastCancerSpecimensbyThin—LayerCytologySlidesZhangZhihui，ZhaoLinlin，GuoHuiqin，PanQinjingDepartmentofCytopathology，ChineseAcademyofMedicalSciencesCancerHospital，BeijingUnionMedicalCollege，Beijing100021，ChinaCOI"FeSpondingAuthor：PanQiniing，E-mail，Pqiing@hotmail．con'IAbstract：ObjectiveTodetectoVerexpressionofER，PR，HER一2byTLCinbreastcancer，compare，theresultsofimmunoeytochemistry(ICC)withthatofimmunohistochemistry(IHC)．andobservetheira—vailableinadvancedbreastcancer．MethodsThemethodsofICCandIHCwereusedinbreastcancerspecimens．ResultsThesatisfiedslidesforER。PRandHER2were195。194and202casesinall205ca—ses，respectirely．Therewere2exfoliativeslides．Theyoccupied1．0．Onehundredandseventycaseshavehistopathologyresults．ThepositiveexpressionrateofERwas60．0inIHC，58．5inICC(P0．765)，PRwas70．6inIHC，59．3inICC(P<0．05)，andHER一2was57．5inIHC，38．1inICC(P<()．05)．Thepatientsweremostlyintheagegroup51～61yearsold(59cases，32．3)．50．8patientshadlymphnodemetastasisinthisgroup。47．1patientshadlymphnodemetastasisin40～5f)yearsoldagegroup．14outof16caseshadlymphnodemetastasisin29～39yearsoldagegroup．Theyoccupied87．5．ER+／PR+／HER一2overexpressionwerethehighestin73yearsoldagegroup．andthelowestin29~39yearsgroup．Thiswasconsistantwithclinicalfeatureandcytologicmorphology．There—suitsofassessmentofFNAspecimensagreedwiththoseofthehistologicalsectionsin150ofthe160casesinER．Theirsensitivity，specificity，positivitypredictivevalue，negativepredictivevalue，falsepositiverate，falsenegativeratewere94．1，93．2，96．0，90．2，2．5and3．8，respectively．TheresultsofassessmentofFNAspecimensagreedwiththoseofthehistologicalsectionsin140ofthe159casesinPR．Theirsensitivity，specificity，positiv／typredictivevalue，negativepredictivevalue，falsepositiverate．falsenegativeratewere88．5，87．0，94．3，75．5，3．8，and8．2，respectively．TheresultsofassessmentofFNAspecimensagreedwiththoseofthehistologicalsectionsin134ofthe167casesinHER2．Theirsensitivity，specificity，positivitypredictivevalue，negativepredictivevalue，falsepositiverate，falsenegativeratewere67．7，97．2，97．0，69．0，1．2and18．6，respectively．ConclusionTheresultsofassessmentofICChaveagoodcorrelationwiththatofIHCWhenonlycvtologicmaterialmight．beavailable，itwouldbeusefultobeabletoidentifyER，PRstatusbyusingFNAspecimens．Theintratumoralheterogeneityofpositiveceilswasthemainreasonfordiscordantresultsbetweencytologicalandhistologicspee—imens．HER一2diagnosisstandardofICCshouldnotbethesameasthatofIHCinHER一2test．Her2overex—pressioncanbetestedinFNAspecimens，whereaspositiveHER-2stainingonTLCwouldrequirefurthervalidationbyFISH．Keywords：Fineneedleaspiration；Breastcancer；Thin-Layercytology；Immunocytochemistry；Hormonereceptor摘要：目的通过细胞涂片检测乳腺癌ER、PR及HER2的过度表达与术后组织病理切片比较，探讨其应用于临床晚期患者的可行性。方法细针针吸液基薄层涂片(TLC)、免疫细胞化学方法(ICC)和术后组织病理切片的免疫组织化学(IHC)比较。计算准确率、敏感度、特异性、阳性预见值、阴性预见值、假阳性率、假阴性率等。结果检测免疫细胞化学TIc标本205例，满意标本ER为195例；PR／94例；HER2为202例，脱片均有2例，占1．0。i70例有组织病理学结果对照。ER阳性表达率：IHC为60．(j，ICC为58．5(P=0．765)；PR阳性表达率：IHC为70．6，ICC为59．3％(P<()．05)；HER一2阳性表达率：IHC诊断准确性为57．5，ICC为38．1(P<()．05)。乳腺癌在51～61岁年龄组例数最多(59例，占32．3)，淋巴结转移占收稿日期：2011—08—29；修回日期：2011—11-175()．8；其次为4()～50岁组(51例，占基金项目：北京希望马拉松专项基金资助项目279)，淋巴结转移占47．1；29～39岁(RX2007A5)年龄组例数最少(16例，占87)，但有14作者单位：100021北京，中国医学科学院中国协例发生淋巴结转移，占87．5。本组病例和医科大学肿瘤医院病理科细胞学室ER+／PR+／HER一2在大于73岁年龄组表通信作者：潘秦镜，E—mail：pqjing@hotmail．corn达率最高，为8．7，随着年龄的递减表达率作者简介：张智慧(1966)，女，硕士，副主任医师，主要从事细胞病理学工作降低，29~39岁年龄组表达率仅为0．5， ·834·肿瘤防治研究2012年第39卷第7期这和临床表现及细胞形态是一致的。与组织病理学IHC结内源性过氧化物酶，滴加10的血清白蛋白室温封果比较准确率、敏感度、特异性、阳性预见值、阴性预见值、假闭2()rain，滴加一抗，4~C冰箱过夜，PBS洗涤，滴加阳性率、假阴性率。ER分别为93．8(Kappa=()．867)、二抗，37℃25rain，PBS洗涤后DAB显色，镜下控制941、93．2、96．0、90．2、2．5和3．8；PR分别为反应时问，蒸馏水洗涤，苏木精对比染色。PBS替代88．1(Kappa=0．722)、88．5、87．()、94．3、75．5、3．8和8．2：HER一2分别为8()．2(Kappa=()．616)、一抗作阴性对照，每例均有阴性对照，每批均有阳性677、97．2、97．0、69．()、1．2和18．6。结论细标本作对照。ER、PR、HER一2稀释比均为1：f00，胞学ICC检测ER、PR及HER一2的过度表达，与组织学IHC鼠单克隆抗体、一抗、二抗及DAB均为Zymed公司比较，其准确率高，一致性好。当组织学标本难以取得时，可产品。以考虑用细针穿刺标本检测ER、PR的表达。涂片检测受体1．4结果判定应注意肿瘤细胞的异质性。HER2结果的评判不应与组织学等同，细胞学可以作为筛选，阳性者宜进一步做FISH(1)针吸细胞学涂片结果及免疫细胞化学结果检测。均由两位细胞病理学医师判定。(2)免疫细胞化学关键词：细针针吸穿刺；乳腺癌；液基薄片；免疫细胞化学；激结果：每例中每个抗体检测的有效细胞量应>100素受体个，>1()()个细胞为满意标本。ER、PR阳性细胞为中图分类号：R737．9文献标识码：A细胞核呈中等或强的深棕黄色，涂片中>5细胞呈文章编号：1000—8578(2012)07—083305阳性时，诊断阳性，细胞核未呈棕黄色诊断阴性]。0引言HER2阳性是根据美国批准的Herceptest评分系雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与乳腺癌患统进行评判，阳性细胞为整个肿瘤细胞膜呈现中等者的内分泌治疗密切相关，HER2的过度表达与乳腺强度的着色，阳性细胞数>1()诊断阳性，细胞膜不癌患者的分子靶向药物治疗也密切相关。目前ER、着色，着色弱或部分膜着色均诊断阴性]。免疫细PR、HER一2检测多采用手术切除的石蜡包埋切片或胞化学结果与组织病理的免疫组织化学结果对比，核芯针组织切片(CNB)标本，然而对于乳腺癌晚期、以组织学结果为金标准，仅有细胞涂片为阳性，组织复发和转移灶病例，细胞学细针穿刺(FNA)标本容易病理结果为阴性，判为假阳性；细胞涂片为阴性，组得到。传统涂片检测ER、PR的表达已有报道，但是织病理结果为阳性。判为假阴性。涂片中血多，且易脱片【。本研究用细针穿刺的液基1．5统计学方法薄层涂片(TIC)和免疫细胞化学(ICC)检测乳腺癌患应用SPSS13．()软件进行统计学分析。对研究者ER、PR及HER_2的过度表达，结果与术后组织病对象的细胞学与组织学结果对比采用)[‘检验的统计理切片免疫组织化学(IHC)比较，探讨其应用于晚期学方法，以P％0．05为差异具有统计学意义；一致乳腺癌患者的可行性。性比较采用Kappa方法，KappaS>()．6表明一致性好，KappaS()．8表明一致性非常好。1资料与方法1．1资料收集2结果收集我院2008年11月一-2{)1【】年5月间乳腺癌2．1免疫细胞化学TIC标本标本205例，其中乳腺癌腋下淋巴结转移灶5例；锁检测免疫细胞化学TIC标本2()5例。满意标骨上淋巴结转移灶6例；乳腺肿块针吸标本194例，本ER为195例，占95．1；PR为194例，占均为初诊患者，未做过任何治疗。2例男性，其他均94．6；HER一2为202例，占98．5，脱片各有2为女性；年龄29～92岁，中位年龄53岁。左乳119例，占1．0，见表1。例，右乳75例，淋巴结转移11例。205例做ER、PR表1ER、PR、HER一2检测的免疫细胞化学标本情况及HER一2的检测，17()例有术后组织病理结果Table1SpecimenssituationofER，PR，HER-2detectedbyICC对照。TLe。。■ER()PR(％)HER一2()1．2细胞学标本的制备液基薄层涂片制备：用22G一次性注射器(针头规格0．7ram)吸取组织。吸出物做传统涂片一张，剩余标本洗入Cytolyt固定液，离心，弃上清液，将沉淀物倒人Cytyc液，固定15min后，用TP2000(美国cytyc公司)制备薄层细胞涂片4张，95乙醇固定24h，一张HE染色，另外三张做免疫细胞化学。Note：TIC：Thin—Iayerchromatography；ER：estrogenrecep1．3免疫细胞化学tor；HER一2：humanepidermalgrowthfactorreceptor2：PR采用SABC法，抗原修复，3H：O溶液灭活pVOgesterOnereceptor 肿瘤防治研究2012年第39卷第7期·837·胞形态一致。在40~50岁组和29～39岁组患者细graphicandhistopathologiccorrelationsr'J]．ActaCytol，2011，55(1)：30—7．胞分化差，异型性明显，发生腋下淋巴结转移的比例[6]TafjordS，BohlerPJ，RisbergB，eta1．Estrogenandprogester高，16例29～39岁患者，14例发生腋下淋巴结转onehormonereceptorstatusinbreastcarcinoma：comparisonof移，转移率为87．5。immunocytochemistryandimmunohistochemistry[J]．Diagn细针穿刺的液基薄层涂片检测乳腺癌患者ER、Cytopathol，2002，26(3)：13741．PR及HER一2的过度表达，与组织学IHC比较，其[7]ZhangZH，ZhaoII，GuoHQ，eta1．ApplicationofThinlayercytologySmearsandimmunocytochemistryinidentifyingthe准确率高，一致性好。此方法损伤小、简单、快速。celltypesofmalignanttumors[J]．ZhongguoZhongLiuIAn当组织学标本难以获得时，可以考虑用细针穿刺标Chuang，2008，35(6)：332—5．[张智慧，赵琳琳，郭会芹，等．液本检测ER、PR的表达，预测内分泌治疗的反应。涂基薄片与免疫细胞化学结合鉴别恶性肿瘤细胞的类型[J]．中片检测受体应注意肿瘤细胞的异质性。HER～2的国肿瘤临床，2008，35(6)：332—5．]检测与组织学比较特异性比敏感度好。细胞学[8]KapilaK，AnitaJT，FrancisIM，eta1．ExpressionofestrogenHER～2结果的判读应该降低阳性标准，不应与组织receptorinfineneedleaspiratesofbreastcardnomaEJ]．ActaCytol，201()，54(1)：25—30．学等同，细胞学可以作为筛选，阳性者进一步做[9]NishimuraR，AogiK，YamamotoT，eta1．Usefulnessofliquid～FISH检测。basedcytologyinhormonereceptoranalysisofbreastcancerspecimens[J~．VirchowsArch，2011，458(2)：153—8．参考文献[1(J]KomatsuK，NakanishiY，SekiT，eta1．Applicationofliquid—[1]ZhangZH，TengMF，LiuSF．ImmunohistochemicalstudyonthebasedpreparationtofineneedleaspirationcytologyinbreastexpressionofER，EGFR，p53oncoproteininbreastcancers[J]．cancerEJ]．ActaCytol，2008，52(5)：5916．ZhenDuanBingLiXueZaZhi，1998，5(1)：257．[张智慧，滕茂[11]GongY，SymmansWF．KrishnamurthyS，eta1．Optimalfixa—芳，刘树范．ER，EGFR，p53在乳腺癌的免疫组化研究[J]．诊tionconditionsforimmunocytochemicalanalysisofestrogenre—断病理学杂志，1998，5(1)：25—7．]ceptorincytologicspecimensofbreastcarcinomaEJ]．Cancer，[2]KonofaosP，KontzoglouK，GeorgoulakisJ，eta1．Theroleof2004，102(1)：3440．I'hinPrepcytologyintheevaluationofestrogenandprogester[12]MorikiT，TakahashiT，UetaS，eta1．Hormonereceptorstatusandonereceptorcontentofbreasttumors[J]．SurgOncol，2(11)6，l5HER2／neuoverexpressiondeterminedbyautomatedimmunostain(4)：25766．eronroutinelyfixedcytologicspecimensfrombreastcarcinoma：[3]BeatlyBG。BryantR，WangW．eta1．HER2／neudetectionincorrelationwithhistologicsectionsdeterminationsanddiagnosticfine—needleaspiratesofbreastcancer：fluorescenceinsituhypitfalls[J]．DiagnCytopathol，2004，30(4)：2516．bridizationandimmunocytochemicalanalysis[J]．AmJClin[13]SlamonDJ，GodolphinW，JonesIA，eta1．StudiesoftheHER一Pathol，2004，122(2)：246—55．2／neuproto—oncogeneinhumanbreastandovariancancer~R]．r,43TseGM，TanPH．Diagnosingbreastlesionsbyfineneedleaspi—Science，1989，244(491)5)：70212．rationcytologyorcorebiopsy：whichisbetter7[J]．Breast[14]BedardYC，PollettAF，LeungSW，eta1．AssessmentofthinCancerResTreat，2010，123(1)：18．layerbreastaspiratesforimmunocytochemicalevaluationofr-s]LiewPI，liuTJ，HsiehMC，eta1．RapidstainingandimmediateHER2statusEJ]．ActaCytol，2003，47(6)：979—84．interpretationoffineneedleaspirationcytologyforpalpable[编辑：周永红；校对：安凤]breastlesions：Diagnosticaccuracy，mammographic，uhrasono