HEK-293T细胞转染操作步骤.pdf

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1、使用X-tremeGENEHPDNATransfectionReagent转染HEK-293T细胞系慢病毒生产的优化实验步骤5在转染实验前18~24小时，将HEK-293T细胞按照5.0×10细胞/孔的密度接种到6孔板中，每孔中含有2ml完全生长培养基（60~80%的细胞汇集度）。细胞培养过夜。经优化的转染结将X-tremeGENEHPDNATransfectionReagent，DNA和稀释培养基（如果。转染质粒：Opti-MEM®IReducedSerumMedium或无血清培养基）孵育到室温pGIPZ-eGFP（+15至+25℃）。使用前将转染试剂轻柔混匀。在无菌管中加入180μl

2、稀释培养基。加入2μg质粒DNA（按摩尔化学计量混合1:2:2比例的表达载体，包装质粒和包膜质粒，体积共计20μl)，轻柔混匀。在上述DNA稀释液中加入6μlX-tremeGENEHPDNATransfectionReagent（转染试剂：DNA=3：1），轻柔混匀。+15至+25℃下孵育15~30min，形成转染复合物。在细胞培养板中以逐滴加入的方式，在每孔中加入200μl转染复合物。轻柔晃动6孔板，将转染复合物和细胞培养物混匀。细胞继续培养24-72h后，进行病毒滴度检测。