质粒转化、细胞转染步骤.doc

《质粒转化、细胞转染步骤.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、转化：将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内使之获得新的遗传特性。转染（transfection）:将含有目的gene的载体转到真核cell内转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程。有时也指在真核cell之间通过逆转录病毒转移和获得cellDNA的过程。1.质粒转染（transfection）6-well-plate每well60-70%时transfection接种时2.5×105个/ml/well质粒DNA转染液优化培养基opti-MEM步骤：2.5ug质粒DNA+200ulopti-MEM+6ul转

2、染液混匀室温静置15min待转染cell换优化培养基opti-MEM1.3ml，切记要轻轻加培养基，勿冲起cell把transfectioncomplex(200ul)轻轻均匀滴入cell培养基中，十字形摇晃plate,混匀37℃，CO2培养箱培养2.转化：外源DNA(质粒作为载体)导入受体细胞（大肠杆菌感受态cell）步骤：50ul感受态cell（一管）加入12ul质粒DNA→轻柔混合↓冰浴30min↓42℃热激90s↓迅速冰浴2min↓向管中加入培养基，混匀后37℃震荡培养（﹤225rpm）1h,使细菌恢复正常生长状态↓涂板正

3、培1h后，倒培过夜