肺癌细胞条件培养液刺激成骨细胞增殖但抑制其分化.pdf

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1、868WWW．tumorsci．org肿瘤2012年11月第32卷第11期TUMORVo1．32，November2012DOh10．3781~．issn．1000—7431．2012．11．003Copyright◎2012byTUMOR基础研究·BasicResearch肺癌细胞条件培养液刺激成骨细胞增殖但抑制其分化黄晨，刘栓得，许红飞，张超，初同伟，周跃第三军医大学第二附属医院骨科，重庆400037【摘要】目的：体外研究肺癌细胞条件培养液(conditionedmedium，CM)对前骨细胞亚克隆14细胞株MC3T3一E1Subclone14增殖、分化和矿化的作用。方

2、法：收集人肺腺癌A549细胞CM，以10％A549CM和20％A549CM加入MC3T3一E1Subclone14细胞培养液，采用CCK一8(cellcountingkit一8)法检测MC3T3一E1Subclone14细胞增殖，碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)试剂盒检测MC3T3一E1Subclone14细胞中ALP的活性，茜素红染色检测MC3T3一E1Subclone14细胞的矿化能力，实时荧光定量PCR检测MC3T3一E1Subclone14细胞中ALP、骨钙蛋白(osteocalcin，OCN)、I型胶原蛋白1(collagentypeI

3、alpha1，Colla1)及RUNX2(runt-relatedtranscriptionfactor2)mRNA的表达。结果：MC3T3一E1Subclone14细胞培养24和48h时，10％A549CM组和20％A549CM组的细胞增殖率均高于不加A549CM的对照组(P<0．05)：10％A549CM组和20％A549CM组MC3T3一E1Subclone14细胞中ALP活性低于对照组(P<0．05)；A549CM组矿化结节的数量和面积均小于对照组(P<0．05)；A549CM组MC3T3一E1Subclone14细胞中ALP、OCN、Collal和RUNX2mRN

4、As的表达水平明显低于对照组(P<0．05)。结论：肺癌A549细胞CM可促进MC3T3一E1Subclone14细胞的增殖，抑制其分化和矿化。f关键词】肺肿瘤；成骨细胞；细胞增殖；细胞分化[中图分类号】R730．6；R734．2【文献标志码】A【文章编号】1000～7431(2012)11—0868—06ConditionedmediumoflungcancercellsstimulatestheproliferationofosteoblasticcellsbutinhibitstheirdifferentiationHUANGChen，LIUShuan—de，XUHo

5、ng—fei，ZHANGChao，CHUTong—wei，ZH0UYueDepartmentofOrthopedics，SecondAffiliatedHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037，China[ABSTRACT]0bjective：TostudytheeffectsofA549CM(conditionedmedium)ontheproIiferation。differentiationandmineralizationofpre—osteoblasticMC3T3一E1Subclone14ce

6、lls．Methods：TheCMOfIungcancerA549cellswascolIected．MC3T3一E1Subclone14cellswerejncubatedwithcuIturemediumcontaining10％A549CMor20％A549CM。TheproliferationofMC3T3一E1Subclone14cellswasdetectedbyCCK-8(cellcountingkit-8)method．TheALP(alkalinephosphatase)activityofMC3T3一E1Subclone14celIswasrneasur

7、edbyALPkit．ThemjneraljzatjonofMC3T3一E1Subclone14ceIJswasdetectedbyalizarinredstaining．TheexpressionlevelsofALP，OCN(osteocalcin)，CoI1al(collagentypeIalpha1)andRUNX2(runt—relatedtranscriptionfactor2)mRNAsweredetectedbyreal—timefluorescencequantitative—PCR．Result