β-链蛋白信号通路观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响.pdf

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1、中国医学科学院学报ACTAACADEMIAEMEDICINAESINICAE·论著·基于Wnt／[3-链蛋白信号通路观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响张博，刘娜，顾斌，吴昊，高羽萱，王东胜，刘洪臣中国人民解放军总医院口腔医学研究所，北京100853通信作者：刘洪臣电话：010-66936254，电子邮件：liuhongchenpla301@163．con摘要：目的观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响，并结合Wnt／13一链蛋白信号通路初步探讨高糖对骨髓基质细胞增殖的影响。方法从Wistar大鼠下颌骨中分离培养骨髓基质细胞，分别给予

2、不同糖浓度(5．5和16．5mmoUL)干预，采用噻唑蓝法观察骨髓基质细胞1、3、5、7d时的增殖情况，采用流式细胞仪对高糖干预5d细胞进行细胞周期检测，Western免疫印迹检测5d时B一链蛋白和细胞周期蛋白D1的表达，实时定量多聚酶链反应检测淋巴增强因子一1和细胞周期蛋白D1的mRNA表达。结果噻唑蓝法检测结果显示，1d骨髓基质细胞在两种糖浓度中的光密度值差异无统计学意义(P=0．700)，3、5、7d时16．5mmol／L组的细胞光密度值显著低于5．5mmol／L组(P=0．006，P=0．002，P=0．003)。5d的细胞周期结果显示，与5．

3、5mmo~L组细胞相比，16．，mmo~L组细胞可以抑制细胞从Gl期向s期转化，16．5mmo~L组细胞的增殖指数显著低于5．5mmo~L组(P=0．014)。与5．5mmo~L组相比，16．5mmol／L组细胞明显抑制B一链蛋白的表达，同时Wnt／[3一链蛋白通路中淋巴增强因子一1mRNA及下游细胞周期蛋白D1mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制。结论高糖环境可以通过抑制Wnt／13一链蛋白信号通路中关键因子B一链蛋白、淋巴增强因子一1及下游与细胞增殖相关靶基因细胞周期蛋白D1的表达，进而抑制骨髓基质细胞的增殖。关键词：高糖；骨髓基质细胞；增殖；Wnt

4、中图分类号：R782．12文献标志码：A文章编号：1000—503X(2014)04—0389—05DOI：10．3881／j．issn．1000—503X．2014．04．008ObservingtheEfectofHighGlucoseonProliferationofBoneMarrowStromalStemCellsthroughWnt／[3-cateninPathwayZHANGBo，LIUNa，GUBin，WUHao，GAOYu—xuan，WANGDong—sheng，LIUHong—chenStomatologicalCenter，Chi

5、nesePLAGeneralHospital，Beijing100853，ChinaCorrespondingauthor：LIUHong-chenTel：010—66936254，E·mail：liuhongchenpla301@163．COBABSTRACT：0bjectiveToexploretheeffectofhighglucoseonproliferationofbonema~owstromalstemcellsthroughWnt／[3·cateninpathway．MethodsBonemalTOWstormalcellswereobt

6、ainedfromtheman。dibleofWistarratsandstimulatedwithdifferentconcentrationsofglucose(5．5and16．5mmol／L)．Cellprolifera-tionwasevaluatedwithmethylthiazolyltetrazoliumassay(1，3，5，and7d)andcellcycleanalysisbyflowcy—tometry(5d)．B-cateninandcyclinD1proteinlevelsweredeterminedbyWesternblo

7、t．ThemRNAexpressionoflymphoidenhancerbindingfactor一1(LEF-1)andcyclinD1weretestedbyreal·timepolymerasechainreaction．基金项目：国家自然科学基金(81271180，31200741)和北京科技新星计划(zl41110o叭80ooo)SupportedbytheNationalNaturalSciencesFoundationofChina(81271180，31200741)andBeijingNovaProgram(Z14111000180

8、000)；第一二位作者对本文贡献一致Thefirsttwoauthorscontributed