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1、脂肪干细胞的三维球形培养王婵I,戴应I,郭永龙I,杨艳2,刘庆2,陈建苏‘2
2、暨南大学再生医学教育部重点实验室，广东省广州市510632：2暨南大学医学院眼科研究所，广东省广州市510632Three-dimensionalsphericalcultureofadipose-derivedstemcellsWangChanDaiYing1,GuoYong-long',YangYan2,LiuQing2,ChenJian-suL2】KeyLaboratoryforRegenerativeMedicineofMinistryofEduc
3、ation,JinanUniversity,Guangzhou510632,GuangdongProvince,China;2InstituteofOphthalmology,MedicalCollegeofJinanUniversity,Guangzhou510632,GuangdongProvince,China摘要背景：大多哺乳类细胞在正常生理状态下多以三维结构存在，为还原细胞本身在体内的自然状态，很多研究者开始尝试在体外对细胞进行三维培养,球形培养是一种常见的三维培养模式。目的：尝试用3种不同的方法在体外对人脂肪干细胞进行球形
4、培养，并观察其生物学特征。方法：对提取的脂肪来源细胞进行表面Marker流式检测以及成脂成骨诱导鉴定后，证实为脂肪干细胞。先后用低黏附培养法、hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法3种方法在体外对脂肪十细胞进行球形培养，对3种方法形成球形的特点进行比较分析，并通过Imagej软件计算出3组多细胞球体的平均面积,利用Viability/CytotoxicityAssayKitforAnimalLive&DeadCells试剂盒对3组多细胞球体进行活力检测。结果与结论：①通过流式细胞术鉴定细胞表型标志物，其中CD29,
5、CD44,CD59完全阳性，同时成脂成骨诱导也为阳性，证实提取的细胞为脂肪十细胞。3代以内脂肪十细胞多呈长梭形，并克隆状生长。②低黏附培养法、hanging-drop培养法、Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞聚集成球形生长，但所成多细胞球形有所差异。低黏附培养法所形成的细胞球形大小不一，不易控制；而hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞形成大小均一的球形，但在大小和形成时间上有所不同。③3种不同方法所形成的球形细胞均保持较好的细胞活力。中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞；骨髓十细胞;造
6、血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞：胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程全文链接：关键词：干细胞；脂肪干细胞；诱导分化；球形培养；活力；低黏附培养；hanging-drop培养；Eppendorf管培养；国家自然科学基金：Abstract:BACKGROUND:Manytypesofmammaliancellsaggregateanddisplaythree-dimensionalmulticellularspheroidswhentheyareinnormalphysiologicalconditions.In
7、ordertoobserveandexplorecellularnaturalstates,manyresearcherstrytousesphericalcellcultureinvitro,acommonthree-dimensionalculturepattern.OBJECTIVE:Tousethreedifferentmethodsforsphericalcultureinvitroofadipose-derivedstemcellsandtoobservetheirbiologicalfeatures.METHODS:Ad
8、ipose-derivedstemcellswereconfirmedbytheanalysisofthemarkersforcellphenotypesaswellasadipogenicandosteogenicdifferentiationpotentialassays.Threedifferentmethodsofspherecultureswereusedasfollows:(1)ultralowattachmentculture;(2)hanging-dropcultureand(3)Eppendorftubecultur
9、e.Thesphereformationwascomparedamongabovethreemethods.WeusedImagejtocalculatemeanareasofthesespheres.Andweused
