脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗效应及作用机制.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jan；49(1)·27·脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗效应及作用机制张维娜，刘尚全，袁嫒，李菲，龚一昕摘要目的研究脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗效PDX一1、MafA可能是胰岛素基因在B细胞中特异性应，并探讨其作用机制。方法用四氧嘧啶建立1型糖尿病表达机制之一。该研究将建立1型糖尿病小鼠模小鼠模型，造模成功后第5天给予脐血干细胞(0．1ml／100g型，用脐血干细胞干预观察其对小鼠的治疗作用，评体重)

2、尾静脉注射，采用放射免疫法检测正常组、模型组及治价胰岛功能，并观察其对胰腺组织中PDX．1以及疗组小鼠血清胰岛素、C肽水平，并以OGTT实验评价小鼠MafA表达水平的影响，初步探讨脐血干细胞治疗1胰岛功能，HE染色法观察各组小鼠肾脏及胰腺形态学特点，型糖尿病作用机制。用Westernblot和PCR法检测胰腺组织胰十二指肠同源盒1(PDX一1)以及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A基因(MafA)1材料与方法的表达。结果模型组小鼠血糖明显升高，血清胰岛素、C1．1材料肽水平下降，胰腺组织PDX一1及M

3、afA蛋白表达下降，与正常组比较差异有统计学意义(P<0．05)；治疗组与模型组相1．1．1实验动物健康3月龄雄性SD小鼠45只，比，小鼠血糖水平下降，血清胰岛素、C肽水平升高(P<普通级，25—33g。标准实验条件下喂养，自然采0．01)，胰岛素敏感性增加。HE染色提示小鼠肾脏及胰腺形光，所有小鼠接受标准啮齿类食物，自由进食、饮水。态学变化得到改善，胰腺组织PDX一1及MafA蛋白表达升高1．1．2主要仪器及试剂脐血干细胞由合肥市滨(P<0．05)。结论脐血干细胞改善1型糖尿病小鼠的症湖干细胞

4、中心血库提供，浓度为1×10／L；微量血状，降低血糖，改善小鼠胰岛功能及靶器官形态结构，并且具糖仪(美国强生公司)；四氧嘧啶(美国GIBCO公有上调PDX-1及MafA蛋白水平的作用，脐血干细胞对1型司)；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒、C肽、糖尿病小鼠具有一定的治疗效应。胰岛素试剂盒(北京北方生物技术研究所)；TRIzol关键词脐血干细胞；糖尿病；胰十二指肠同源盒1；肌腱膜(美国Invitrogen公司)；逆转录试剂盒(美国Pro-纤维肉瘤癌基因同源物A基因mega公司)；PDX一1

5、一抗、MafA一抗(美国Santa中图分类号R329；R587．1Cruz公司)；蛋白质抽取试剂盒和辣根过氧化物酶文献标志码A文章编号1000—1492(2014)01—0027—06标记二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)；ECL化学发光剂(美国Thermo公司)；胶片(美国Kodak脐血干细胞是一类具有多种分化潜能的祖细公司)。胞，研究表明其在体内外均可以诱导分化为胰岛1．2方法细胞，具有一定的降糖作用，分离纯化后的脐血干细1．2．1小鼠分组和造模所有小鼠自由进食饮水，胞具有人体配对概率高、

6、增殖能力强及排斥反应低自然光照，饲喂环境温度为(25±1)cc，适应性喂养下等特点，使脐血干细胞成为更多该方面研究者的1周后，随机均分为3组：正常组、模型组、治疗组。选择。胰岛十二指肠同源盒1(pancreasduodenal治疗组和模型组是经尾静脉一次性注射四氧嘧啶homeobox．1，PDX．1)是胰腺发育和胰岛素基因转录55mg／kg体重，2h后给予5％葡萄糖灌胃预防反应表达的早期关键性转录因子，肌腱膜纤维肉瘤癌性低血糖的发生，3d后剪尾取血，微量血糖仪检测基因同源物A基因(A．Mafmu

7、sculoaponeuroticfibro—空腹血糖，血糖≥16．7mmolfL为造模成功。sarcomaoncogene，MafA)是促进胰岛B细胞发育和1．2．2药物干预造模成功后第5天治疗组给予维持功能的主要胰岛素转录因子J，研究表明尾静脉一次性注射脐血干细胞，浓度为1×10／L，2013—10—08接收按照1ml／lO0g体重给药J。模型组经尾静脉一基金项目：国家自然科学基金(编号：30840106)次性注射同等体积的脐血干细胞缓冲液；正常组尾作者单位：‘安徽医科大学第三附属医院内分泌科

8、，合肥230061静脉注射同等体积的生理盐水。观察各组小鼠的进合肥市滨湖医院中心实验室，合肥230601食、饮水、体重变化情况。并分别于第5、10、15天取作者简介：张维娜，女，硕士研究生；各组小鼠尾静脉血检测血糖；本实验研究遵循“实刘尚全，男，副主任医师，硕士生导师，责任作者，E-mail578128381@qq．corn验用动物管理和使用指南”。·28·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jan；49(1)1．2．3口服葡萄糖耐量试验(0