腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究.pdf

《腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、·1218·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9)腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究彭登付，胡冰，何义富，陈健，袁幸，王伟，李庆摘要目的观察重组人血管内皮抑制素对艾氏腹水瘤管通透性来初步探讨其相关的作用机制，以便更好(EAC)小鼠的治疗作用，并初步探讨其相关作用机制。方法的指导临床用药。采用四甲基偶氮唑蓝(MTr)法检测不同终浓度的重组人血管内皮抑制素(0、5、10、20、40g／m1)对体外培养的1材料与

2、方法EAC细胞的抑制率；利用EAC细胞建立腹水瘤小鼠模型，将1．1主要的试验材料及仪器10％胎牛血清、164054只腹水瘤小鼠随机分为3组：A组(重组人血管内皮抑制培养基(美国Hyclone公司)；EAC细胞珠(南京先素8ms／kg，每12h腹腔注射1次)、B组(重组人血管内皮声药业细胞室赠送)；MTr、伊文思蓝(美国Sigma公抑制素8ms／kg，每24h腹腔注射1次)、C组即对照组(生理盐水0．2ml／只，每12h腹腔注射1次)。详细记录小鼠司)；清洁级ICR小鼠，雄性，4—5周龄，16～1

3、8g购腹水量、体重及生存期；酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠于上海斯克实验动物有限公司；重组人血管内皮抑腹水血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-2(MMP一制素(商品名为恩度，15mg／支，南京先声药业)；小2)；并通过尾静脉注射伊文思蓝染液间接反映微血管通透鼠VEGF、MMP一2的酶联免疫吸附实验(ELISA)试性。结果体外实验显示，不同浓度的重组人血管内皮抑制剂盒(美国R&D分装)；CO恒温培养箱(日本素对EAC未见抑制作用；体内试验显示，重组人血管内皮抑SANYO公司)；光学

4、显微镜及其拍照系统(日本O-制素组(A组和B组)小鼠的体重、腹水量及腹水中VEGF和LYMPUS公司)；酶标仪(美国Thermo公司)。MMP-2浓度均低于对照组，生存时间较对照组延长(P<1．2试验方法0．05)；3组小鼠血管通透性、A组与B组之间的各项指标差异无统计学意义(P>0．05)。结论腹腔内给药治疗小鼠1．2．1体外细胞培养与MTYEAC细胞复苏后培EAC疗效较好，其作用机制可能与抑制VEGF及MMP一2的养于含10％胎牛血清的1640培养基中(内含1％的生成有关，提示重组人血管内皮

5、抑制素在临床上治疗恶性腹双抗：青霉素100U／ml，链霉素100U／m1)，于37水有较好的应用前景。℃、5％CO，培养箱中培养；取对数生长期细胞用关键词重组人血管内皮抑制素；艾氏腹水瘤；血管内皮生0．2％台盼蓝染色鉴别细胞活力大于90％，配制成5长因子；基质金属蛋白酶_2×10个／ml的细胞悬液，接种于96孔板，200l／，中图分类号R735；R739．9孔，5％CO、37℃培养12h，加入不同终浓度的重组文献标志码A文章编号1000—1492(2014)09—1218—04人血管内皮抑制素(

6、0、5、1O、20、40)ml及1Oml的顺铂(cisplatin，DDP)，培养细胞24h。每重组人血管内皮抑制素是我国自主研发的重组孔加入MTI"溶液(5mg／m1)20Ixl，37℃继续培养4人血管内皮抑制素，可以抑制肿瘤血管生成，目前临h，96孔板于1500r／min离心5min，弃培养基，各床上用其治疗恶性胸、腹水均取得了较好的疗孔分别加入150Ixl二甲基亚砜，振荡10min后用酶效¨J，该研究在此基础上通过改变其给药频率来标仪在490nm波长下测定吸光度(opticaldensit

7、y，观察重组人血管内皮抑制素在治疗艾氏腹水瘤OD)值，计算抑制率。抑制率：(对照组OD值一实(ehrlichascitescarcinoma，EAC)小鼠中的疗效，并验组OD值)／对照组OD值×100％。每个浓度设通过检测腹水中的血管内皮生长因子(vascularen．置3个平行孔，实验重复3次。dothelialcellfactor，VEGF)和基质金属蛋白酶一21．2．2体内动物模型的建立用不含血清的1640(matrixmetalloproteinase．2，MMP．2)的浓度及微血培养基

8、将EAC细胞配制成2×10个／ml细胞悬液，2014—05—26接收取0．5ml(约含5×10。个细胞)接种于4周龄的雄基金项目：安徽省科技厅基金资助项目(编号：12070403084)性ICR小鼠左下腹腔，第8天颈椎脱臼法处死小鼠作者单位：安徽医科大学附属省立医院肿瘤化疗科、中心实验室并收集腹水，1000r／min离心5min，弃上清液，生合肥230001理盐水吹洗，再次离心，用生理盐水配制成2×10作者简介：彭登付，男，硕士研究生；胡冰，女，教授，主任医师，硕士生导师，责任作者，E爪／ml细