金黄地鼠原代肝细胞的分离纯化与培养.pdf

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1、2013年5月中国比较医学杂志May，2013第23卷第5期CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINEVo1．23No．5金黄地鼠原代肝细胞的分离纯化与培养王瑶，朱海波(中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，天然药物活性物质与功能国家重点实验室，新药作用机制研究与药效评价北京市重点实验室，北京100050)【摘要】目的建立一种简单、高效的金黄地鼠肝细胞分离、纯化及培养的方法。方法实验采用两步胶原酶原位灌流法分离地鼠原代肝细胞，percoll离心法纯化细胞，台盼蓝染色检测成活率，对所分离培养的原

2、代肝细胞进行形态学鉴定，WesternBlot检测细胞功能。结果经过分离纯化的金黄地鼠肝细胞，细胞成活率为(93．7％±2．1)％，细胞形态呈现不规则多边形，细胞多为双核和多核细胞。细胞在腺苷处理后，AMP激活的蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平明显升高。结论成功建立了金黄地鼠肝细胞分离纯化及培养的方法。【关键词】金黄地鼠；原代肝细胞；两步胶原酶原位灌流法；AMPK【中图分类号】R．332【文献标识码】A【文章编号】1671-7856(2013)05-0055~4doi：10．3969．j．issn．1671．7856．201

3、3．005．013Isolation，purificationandcultureofHamsterprimaryhepatocytesWANGYao，ZHUHai-bo(KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine，MinistryofEducationandKeyLaboratoryofNaturalDrugsBiosynthesis，MinistryofHealth，InstituteofMateria

4、Medica，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Beijing100050，China)【Abstract】0bjecfiveToestablishaneasyandefficientmethodoftheisolation，purificationandcultureofHamsterprimaryhepatocytes．MethodsHamsterPrimaryHepatocyteswereisolatedusingtwo—stepc

5、ollagenaseperfusioninsituandpurifiedbycentrifugationwithPercol1．Theyieldsandviabilitiesweremeasuredbystandardtrypanblueexclusion．Hepatocyteswereidentifiedusingmorphologicobservation．CellfunctionwasevaluatedbyWesternblotmethod．ResultsUndertheopticalmicroscope，theob

6、tainedhepatocytesexhibitedasirregularpolygonwithtwoormorecircularnucleusesineachcel1．Theaverageviabilityofhepatoeyteswas(93．7±2．1)％．Afterincubatedwithadenosine，intracellularAMPKphosphorylationwassignificantlyincreased．ConclusionThemethodforisolating，purifyingandcu

7、lturingHamsterprimaryhepatoeyteswassuccessfullyestablished．【Keywords】Hamster；Primaryhepatocytes；Two—stepcollagenaseperfusioninsitu；AMPK近年来，叙利亚金黄地鼠(SyrianGolden为实验模型进行脂代谢研究有明显优势，因而受到Hamster)已被广泛用于肝脂代谢的研究中¨。。由很多研究者的关注。于金黄地鼠的脂蛋白代谢与人类非常相似，且对高与人肝癌细胞系HepG2细胞相比，金黄地鼠肝脂饮食刺

8、激具有较高敏感性，短时间内即可形血脂脏细胞产生的包括血清载脂蛋白B在内的脂蛋白紊乱和非酒精性脂肪肝，因此作为血脂紊乱模型用与人类低密度脂蛋白(VLDL)密度相似J。该类蛋于调脂化合物的药效学研究。由于金黄地鼠作白是血浆内胆固醇的主要载体。早在1982年，[基金项目]国家自然科学基金项目(No．30973