诺丽果提取物对Wistar大鼠的脾脏淋巴细胞及肝细胞辐射损伤的保护作用.pdf

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1、第32卷第2期辐射研究与辐射工艺学报Vl0l-32．No．22014年4月J．Radiat．Res．Radiat．Process．April2014诺丽果提取物对Wistar大鼠的脾脏淋巴细胞及肝细胞辐射损伤的保护作用张洪财于纯淼王宇陈佳刘树民(黑龙江中医药大学哈尔滨150040)(杭州泰格医药科技股份有限公司杭州200051)摘要将破碎的诺丽果用95％乙醇提取后，分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，得到萃取物。将正丁醇萃取物应用硅胶柱色谱法和ODS柱色谱法分离得到单体芦丁和黄酮苷。观察不同浓度萃取物、单

2、体Rutin和Flavanolglycoside对于Wistar大鼠脾脏淋巴细胞及肝细胞的抗丫射线辐射的保护作用。丫射线吸收剂量为10Gy(1Gy·min)。照射后分别于24h、36h和48h时间点用MTT法检测细胞存活率。结果表明：不同组份对不同的细胞存活率在100％一400％之间变化，明显高于对照组，差别有统计学意义(p<0．0001)。提示诺丽果提取物有抗辐射作用，可被视为辐射保护剂。关键词诺丽果，淋巴细胞，肝细胞，抗辐射中图分类号TL71随着肿瘤发病率的逐年上升，放射治疗在临床液(pH=8．O)、氮

3、蓝四唑(NBT)、烟酰胺腺嘌呤二核苷被广泛应用，如何减低放射治疗对人体淋巴细胞的酸(NADH)、吩嗪硫酸甲酯fPMS)、硫酸亚铁三氯乙损伤，加快放疗后机体免疫功能的恢复成为国内外酸、2一硫代巴比妥酸、9．8mmol·LI。过氧化氢、研究的热点。有文献报道诺丽果提取物有抗氧化、9mmol·L。。的水杨酸、硫酸铜、NH4Ac、Neocuprine、抗辐射、清除自由基等多种生物活性【1。J。为探讨诺0．2mmol-LFe／铁氰化钾磷酸盐缓冲液(pH=6．6)、丽果提取物对脾脏淋巴细胞及肝细胞放射损伤后的l0％三氯

4、乙酸、0．1％氯化铁、MEM培养基。Dulbecco保护作用，本文对诺丽果提取物进行萃取后，验证氏磷酸盐缓冲盐水、PBS、RPMI、1640培养基中：不同极性部位的抗辐射作用。100gg·mL叫青霉素、100gg·mL链霉素、2mmol·LL一谷氨酰胺、10％胎牛血清。Krebs．Henseleit缓冲1材料与方法液、HEPES、四甲基偶氮噻唑蓝MTT、DMSO、塑料盘子、不锈钢丝网、血细胞计数仪、ELISA酶标1．1材料仪(Bio—Rad550，Hercules，CA，USA)、ODS、硅胶雄性Wista

5、r大鼠(体重(200~201g，12—14周)，(200-300目)和BrukerAMX．400。从哈尔滨兽医研究所获得。新鲜诺丽果于2010年7月20日采自海南，经黑龙江中医药大学中药鉴定学1．3诺丽果提取物的制备教研室孙慧峰副教授鉴定为茜草科巴戟天属植物诺新鲜诺丽果12kg，用95％的乙醇溶液加热回流丽(MorindacitrifoliaL．)的新鲜果实，标本保存在黑提取3次，每次2h、乙醇用量l0L，过滤，减压回龙江中医药大学中医药研究院(编号20100720)。收溶剂至无醇昧，得干燥浸膏9lg。将浸

6、膏混悬于10L水中，分别用等体积的石油醚(60—90℃)、氯1．2试剂和仪器仿、乙酸乙酯和正丁醇梯度萃取，每种溶剂萃取3过硫酸钾(K2S2O8)、16mmol·LTris—HC1缓冲次，减压浓缩，得到氯仿组份2．4g、乙酸乙酯组份第一作者：张洪财，男，1983年3月出生，2009年于黑龙江中医药大学获硕士学位，主要研究方向为中药化学，助理研究员，E—mail：zhanghongcai-237@163．corn通讯作者：刘树民，男，教授，博士研究生导师，E—mail：lsm@hljum．net收稿日期：收稿2

7、013-12—13；修回2014—02—13辐射研究与辐射工艺学报2014，32：020203(4)3．2g、正丁醇组份65g、水组份80g。将正丁醇萃2结果取物应用硅胶柱色谱和ODS柱色谱分离得到单体2．1照射24h后脾淋巴细胞和肝细胞的存活率化合物Rutin(45rag)与Flavanolglycoside(53mg)。最后将正丁醇萃取物、Rutin和Flavanolglycoside图1为辐照24h后脾淋巴细胞和肝细胞的存活配成实验所需的各个浓度。率曲线。由图1可知，乙酸乙酯组份的脾细胞存活率在浓度为

8、0．卜0．4gg·mL之间时保持增长，在1．4制备Wistar大鼠脾脏淋巴细胞及肝细胞0．4gg·mL。。时达到顶峰277．01％4-13．85％。在0．4—将用剪刀切碎的Wistar大鼠脾脏置于Dulbecco12．8gg·mL之间时脾细胞的存活率成下降趋势。磷酸盐缓冲盐水中，通过不锈钢网格粉碎。脾细胞与其他组对比(p