碱性成纤维细胞生长因子基因转染对鼠胎肝干细胞培养的优化作用.pdf

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1、·22·中华移植杂志(电子版)2013年5月第7卷第2期ChinJTransplant(ElecfronicEditi0n)。May2013，V01．7，N0．2·实验研究·碱性成纤维细胞生长因子基因转染对鼠胎肝干细胞培养的优化作用郑彬孙峰赵戈【摘要】目的观察以重组腺相关病毒(rAAV)为载体介导碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对体外培养的鼠胎肝干细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养鼠胎肝干细胞，经rAAV作为载体介导bFGF基因转染，分为对照组、空载病毒转染组和bFGF转染组。用逆转录PCR和

2、蛋白质印迹法检测鼠胎肝干细胞转染前、后bFGF基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线和CCK．8法观察细胞生长速度；采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果转染bFGF后，bFGF转染组与对照组、空载病毒转染组相比，bFGF基因和蛋白水平均有表达，细胞的生长速度增快(q=20．43，P=0．1301；q=26．52，P=0．001)，G。／Gl期细胞减少，s期细胞增多(q=72．56，P=0．000；q=32．28，P=0．001)。结论通过rAAV作为载体介导bFGF基因转染能促进体外培养的鼠胎肝干细胞增殖

3、，对其培养有优化作用。【关键词】大鼠；碱性成纤维细胞生长因子；胎肝干细胞；基因转染EfectofbasicfibroblastgrowthfactorgenetransfectionontheproliferationoffetalliverstemcellsZHENGBin，SUNFeng，ZHAOGe．TheThirdDepartmentofGeneralSurgery，CixiPeopleSHospital，Cixi315310，ChinaCorrespondingauthor：ZHENGBin，Em

4、aiZ：phoenix．55@163．corn【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheeffectofbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)genetransfectionmediatedbyrecombinantadeno—associatedvirus(rAAV)asavectorontheproliferationandcellcycleofculturedfetalliverstemcellsinvitro．MethodsFetalliver

5、stemcellswereculturedbythesuspensionculturenvitro，andweretransfectedbybFGFgenemediatedbyrAAVasavector．Fetalliverstemcellsweredividedinto3groups：controlgroup，airbornevirustransfectiongroup，andbFGFgroup．Reversetranscription—PCRandwesternblottingwereusedtoass

6、esstheexpressionofbFGFgeneandproteinonfetalliverstemcells．CellularproliferationwasdeterminedbythecellgrowthcurveandCCK8assay．Thecellcyclewasanalyzedbyflowcytometry．ResultsAfterbFGFtransfection，inthebFGFtransfectiongroup，theexpressionofbFGFmRNAandproteincon

7、tentwereincreased，thecellgrowthspeedwassignificantlyfaster(q=2O．43，P：0．001；q=26．52，P=0．001)，andthenumberof／G1phasecellswasdecreasedandcellnumberinSphasewasincreased(q=72．56，P=0．000；q=32．28，P=0．001)，ascomparedwiththecontrolgroupandairbornevirusgroup．Conclus

8、ionThebFGFgenetransfectionthroughrAAVasavectorcanpromoteproliferationoffetalliverstemcellsculturedandoptimizationoftheculture．【Keywords】Rats；Basicfibroblastgrowthfactor；Fetalliverstemcells；Genetransfection肝干细