雷公藤内酯醇对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制.pdf

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1、雷公藤内酯醇对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制王连青，刘剑，钱文斌，刘燕(浙江大学医学院附属第一医院，浙江杭州310000)摘要：『目的]探讨雷公藤内酯醇(TPL)对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制和凋亡诱导作用及作用机制。『方法]M1T法检测TPL对细胞增殖的影响，Hoechst荧光染色观察凋亡细胞形态变化。AnnexinI流式细胞仪标记法检测TPL对HepG2细胞凋亡作用的影响，Westernblot检测caspase一3、8、9与PARP的表达情况。[结果]经M11、检测，10、20、40、80nmol／L浓度TPL作用24h后HeF·G2细胞的抑制率分别为15．2％、22．

2、5％、34．9％和40．7％；48h后抑制率分别为21．5％、34．8％、44．1％和4J4．8％；72h后抑制率分别为31．6％、47．2％、51．6％和56．0％：抑制作用呈时间和剂量的依赖性。10、20、40、80nmol，L浓度的TPL作用24h的HepG2细胞，hoechst荧光染色显微镜下均出现明显的凋亡细胞；AnnexinV／PI流式细胞仪检测其凋亡率分别为8．89％、9．81％、14．69％和22．04％，对照组凋亡率为7-35％：Westernblot结果显示，其caspase一3、9、PARP蛋白活化显影，且均较对照组显影增强，显影强度随TPL浓度的增加而增强，未

3、见caspase．8活化显影。[结论]TPL通过诱导HepG2凋亡发挥增殖抑制作用，其机制可能与caspase．3、9活化有关，即与线粒体通路相关，与caspase一8即死亡受体通路无关。主题词：雷公藤内酯醇(TPL)；细胞凋亡；肝肿瘤；HepG2中图分类号：R735．7文献标识码：A文章编号：1671—170X(2013)12—0959—05doi：10．11735／j．issn．1671-170X．2013．12．B011TheEffectandMechanismofTriptolideonHumanLiverCancerCellLineHepG2WANGLian-qing，LI

4、UJian，QIANWen—bin，eta1．(TheFirstAfiliatedHospitalofZhejiangUniversitySchoolofMedicine，Hangzhou310000，China)Abstract：『Purpose]rr0investigatetheproliferationandapoptosiseffectofTPLonhumanlivercancercelllineHepG2anditsmechanism．『Methods]TPLwasaddedintoHepG2ceilswiththeconcentrationof10，20。40，80nmo

5、1／LastheTPLtreatedgroups，andtheculturemediumalonewasaddedasthecontrolgroups．TheinhibitoryratesintheHepG2cellswereassessedbyMTFassay．IntheHepG2cellswhichhadculturedfor24h．themorphologicalcharacterswereob—servedbyhoechststaining．andtheapoptosiswasdeterminedbyAnnexinV／PIflowcytometry．Theexpression

6、ofactivatedcaspase3，8，9andPARPproteinswasexaminedbyWesternblot．『Results]，rheinhibitoryratesofHepG2culturedfor24hwith10，20，40，80nmoI／Lconcentra—tionwere15．2％，22．5％。34．9％and40．7％；for48h，21．5％，34．8％，44．1％and44．8％；for72h，31．6％。47．2％，51．6％and56．0％respectively，indoseandtimedependentmanners．WhentheHep

7、G2cellstreatedbyTPLcuhuredfor24h．typicalapoptoticcellswereobservedviahoechststaining．TheapoptosisratesoftheHepG2cellstreatedbyTPLwith10，20，40，80nmol／Lcon—centrationwere8．89％．9．81％．14．69％and22．04％respectively．Theexpressionofactived