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1、番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用论文.freelL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。【关键词】番荔枝内酯；HepG2肝癌细胞株；四甲基偶氮唑蓝Abstract：ObjectiveToobservetheinhibitoryactionofannonaceou
2、sacetogeninsAS-4onhumanlivercancercelllineHepG2invitro.MethodUsingdifferentconcentrationofannonaceousacetageninsgroup(6.25,12.5,.freelL),controlgroup(25μg/mL)ofmasculine(DDP),controlblankgroup,afterroutinecultureof24or48hours,theeffectofannonaceousacetogeninsAS-4onHepG2etryassay(MTT)andinve
3、rtedphase-contrastmicroscopeobserving.ResultAS-4hadthebestinhibitoryeffectonHepG2,thehighestinhibitoryratee-dosagedependent,andthe48hIC50L.ConclusionAS-4haslethaleffectonHepG2invitro,andshoanlivercancercelllineHepG2；MTT番荔枝(AnnonasquamosaLinn.)为番荔枝科(Annonaceae)番荔枝属(Annona)植物,我国浙江、云南等省区均有栽培。为
4、研究其生理活性成分,我们对该植物种子的化学成分进行分析,从中得到3个番荔枝内酯化合物(annonaceousacetogenins),通过体外药物敏感试验筛选发现其中1个内酯AS-4具有很强的体外细胞毒活性。现将其抗肝癌作用的实验研究结果报道如下。1实验材料1.1药物番荔枝内酯类化合物,为本课题组从番荔枝种子中提取分离所得,白色蜡状粉末,分子式C37H66O6。使用前以少许无水乙醇溶解,加生理盐水配制成所需浓度,乙醇终浓度不超过1%。1.2主要试剂和仪器RPMI-1640(美国Gibco公司),新生牛血清(杭州四季青生物制品公司),二甲基亚砜(DMSO),四甲基偶氮唑蓝(MT
5、T,美国Sigma公司),使用前以RPMI-1640培养液配成5mg/mL。96孔培养板(美国CORNING公司),微孔板式连续光谱测读仪(SPECTRAmax340pc384美国分子仪器公司),倒置相差显微镜(日本Olympus公司),CO2孵箱(日本Hirasain,以培养液吹打制成细胞悬液后接种。2.2MTT比色试验取对数生长期HepG2细胞(1×105个/mL),接种于96孔培养板,190μL/孔,每孔加入番荔枝内酯类化合物10μL,使终浓度分别为6.25、12.5、25、50μg/mL(简称药物组),每种浓度设4个平行孔,另设顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对
6、照组(即细胞悬液)。常规培养24、48h后,于每孔中加入MTT溶液(5mg/mL)20μL继续培养4h。终止培养后,吸弃全部上清,加入150μLDMSO/孔,微型震荡器震荡约15min,使结晶物充分溶解后,于微孔板式连续光谱测读仪490nm处测定各孔吸光度OD值,调零孔只含有DMSO。抑制率=(1－实验组平均OD值/肿瘤细胞阴性对照组平均OD)×100%。根据改进寇氏法计算半数抑制浓度(IC50)。2.3倒置相差显微镜观察在MTT试验中,加MTT之前用倒置相差显微镜观察各组培养孔内细胞形态结构的变化,并摄像。2.4统计学方法所有实验数据均以x±s表示,应用SPSS11.5软件
7、进行t检验,P0.05为具有统计学意义。3实验结果3.1MTT比色分析各种浓度番荔枝内酯化合物作用于HepG2细胞不同时间的抑制率(%)见表1。抑制率与浓度呈正相关,并有时间依赖性。48hIC50为6.67μg/mL。表1AS-4对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响(略)注：与空白对照组比较,**P0.01。3.2形态学观察结果在倒置相差显微镜下放大400倍,观察96孔板孔中细胞,番荔枝内酯化合物AS-4可明显抑制体外人肝癌HepG2细胞的生长。药物组细胞逐渐变圆,脱壁,细胞间接触变松,胞浆中颗粒增多,增
