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《过氧化氢对人肝癌细胞株hepg2增殖的促进作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用论文李成刚，高志清，刘瑞，梁欣，海春旭【关键词】过氧化氢【Abstract】AIM:TostudytheroleoflootingtheproliferationofHepG2cellssoastoexaminetheroleofNFκBandcellcycleinthatprocess.METHODS:HepG2cellsulateddirectlybyH2O2.HepG2cellsol/LPDTCfor2hoursbeforetheyol/LH2O2.
2、HepG2cellsinvariousphasesofcellcycleol/LH2O2.TheproliferationofHepG2cellsol/Lstimulatedthegrool/LstimulatedthegrootestheproliferationofHepG2cells,partlythroughaNFκBdependentmechanism.TheproliferationofHepG2cellsinducedbyH2O2mayhavedifferentsensibilities
3、indifferentphasesofcellcycle,anditoccursmainlyinG1phaseofcellcycle.【Keyol/LNFκB抑制剂（PDTC）预处理细胞2h,50μmol/L的H2O2作用HepG2细胞；50μmol/LH2O2分别作用于G1,G2/M,S期细胞，MTT法测定细胞增殖活性.结果：50μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用，此作用可以被PDTC抑制；50μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长.结论：低剂量H2O
4、2可诱导HepG2细胞增殖，该过程可能包含依赖NFκB的信号途径的参与；H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同.freelethylSulfoxide（DMSO）,Pyrrolidinedithiocarbamate（PDTC）、胸腺嘧啶核苷（TdR）均购自美国Sigma公司；970CRT荧光分光光度计由上海三科仪器有限公司生产，ZS2板式酶标仪为北京新风机电技术公司产品.1.2方法1.2.1细胞培养HepG2细胞经2.5g/L胰蛋白酶消化传代后，接种于RPMI1640完全培
5、养基中，培养基中含100mL/L新生牛血清、2g/LNaHCO3、链霉素100mg/L、青霉素10×104u/L，置37℃，50mL/LCO2及饱和湿度孵箱中培养，倒置显微镜观察细胞生长状态.1.2.2MTT比色法检测细胞增殖活性取对数生长期HepG2细胞2.5g/L胰蛋白酶消化，用含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培养基终止消化，调整细胞密度为5×107/L，以每孔200μL接种于96孔板，培养12h后加入终浓度分别为0.1,1,.freelol/L的H2O2，另外设阴性对照孔并用单纯培养
6、基作空白孔.细胞分别于H2O2处理1,24和48h后每孔加入5g/LMTT20μL,37℃孵育4h后终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡10min使紫色结晶物充分溶解，用ZS2板式酶标仪，波长为492nm，检测各孔吸光度值.1.2.3PDTC对H2O2促增殖作用的影响细胞接种方法同前，培养10h后，每孔加入终浓度为20μmol/LPDTC2h后，以终浓度为50μmol/L的H2O2分别处理1,24和48h,MTT法检测细胞增殖状况，方法同前.1.2.4TdR诱导细胞同步化
7、取处于对数生长期的HepG2细胞，用终浓度为2.5mmol/L的TdR分别同步化得到S,G2/M和G1期HepG2细胞，具体方法参照文献［5］.1.2.5H2O2对同步化细胞的作用取按上述方法所得S,G2/M和G1期细胞，用终浓度为50μmol/L的H2O2分别作用1,24,48h,MTT法检测增殖效果，方法同前.统计学处理：实验数据以x±s表示，采用方差分析比较组间差异，组间差别的多重比较采用Duntt检验方法.数据处理采用SPSS11.0统计软件进行.2结果2.1不同剂量H2O2对HepG2细胞的
8、作用实验结果显示，50μmol/L终浓度的H2O2作用细胞24h后，吸光度值与对照组相比显著升高（P0.01）；1mmol/LH2O2作用细胞1h后，吸光度值与对照组相比明显降低（P0.05,Fig1）.2.2PDTC对H2O2促增殖作用的抑制作用20μmol/LPDTC预处理细胞2h后，给予50μmol/LH2O2作用细胞，吸光度值与对照组相比无显著性差异（P0.05），而单独给予50μmol/LH2O2作用细胞24h，吸光度值与对照组相比显著升高（P
