黄独素B诱导小鼠急性肝损伤及其机制.pdf

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1、第39卷第7期寸畚V0L39．Issue7圈中药杂2014年4月Chin。Journ1ofCh。neseaterlaedicaApril，2014黄独素B诱导小鼠急性肝损伤及其机制牛成伟，陆宾，季莉莉，王峥涛，(1．上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室，中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室，上海市复方中药重点实验室，上海201203；2．上海中药标准化研究中心，上海201203)[摘要]目的：观察黄药子中的二萜内酯类成分diosbulbinB(DB)诱导的急性肝毒性，并进一步探讨其对小鼠血清中炎性细胞因子和肝脏血红素加氧酶1

2、(heineoxygenase一1，HO一1)表达的影响。方法：小鼠一次性灌胃给药DB(0，113，150，200mg·)，通过检测血清谷丙转氨酶(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST)，碱性磷酸酶(ALP)的活性来观察DB诱导的急性肝损伤，采用酶联免疫法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF—)，白细胞介素4(IL-4)，白细胞介素1卢(IL．1卢)的含量，采用免疫印迹法(Westernblot)观察HO一1的表达。结果：血清ALT，AST，ALP结果显示，DB113mg·kg灌胃后24h，DB没有引起肝毒性；在150mg·kg时，DB引起微弱的肝损伤

3、；到200mg·kg时，DB诱导明显的肝损伤。ELISA结果显示，DB能够剂量依赖性的增加血清中TNF—OL的含量(P<0．05，P<0．01，P<0．001)，DB(200mg·kg)能够降低IL-4的含量(P<0．01)，而不同剂量的DB对IL一1的含量均没有明显影响。Westernblot结果显示，DB(200mg·kg)能够明显诱导肝组织中HO一1的表达(P<0．叭)。结论：由TNF—介导的炎性肝损伤以及氧化应激损伤可能是DB所诱导的急性肝毒性的主要原因。[关键词]黄药子；diosbulbinB；肝毒性；炎性肝损伤；氧化应激黄药子为薯蓣科薯蓣属植物

4、黄独Dioscoreabul—度(65±10)％，照明时间每天12h。biferaL．的地下块茎，药性苦寒，具有散结消瘿、清1．2药物、试剂与仪器DB为本实验室从黄药子热解毒、凉血止血的作用。临床上除用于甲状腺疾块茎中分离纯化所得，纯度为98．1％，化学结构见病外，还常将黄药子用于多型癌症的治疗¨J。然图1。ALT，AST和ALP试剂盒均购自南京建成生而，黄药子临床应用可引起较严重的肝毒性，严重限物工程研究所；小鼠血清TNF—OtELISA试剂盒购自制了其临床应用和卓有疗效的发挥J。另外，实验上海西唐生物科技有限公司；小鼠血清IL4，IL一1研究同样显示黄

5、药子能够诱导肝损伤J。有研究ELISA试剂盒均购自上海丰翔生物科技有限公司；表明，黄药子的毒性成分主要是二萜内酯类化合预染的标准蛋白分子购自Fermentas；硝酸纤维素膜物4引。本实验室从黄独中分离得到了其主要的二购自Bio—Rad公司；HO．1抗体购自SantaCruz公司；萜内酯类成分diosbulbinB(DB)。本文主要探讨了—actin抗体购自CellSignalingTechnology公司；山DB对小鼠的急性肝毒性，并用ELISA和Western羊抗兔二抗购自JacksonImmunoResearch；化学发blot方法进一步观察了DB对小

6、鼠血清炎性细胞因光检测系统购自AmershamLifeScience(英国)。子含量和肝重要抗氧化酶HO．1表达的影响。PowerWaveXS酶标仪(Bio-Tek公司)；Eppendorf1材料与方法5415R低温高速离心机(德国Eppendorf公司)；蛋1．1动物ICR小鼠，体重18—22g，购自上海斯白电泳仪(美国Bio—Rad公司)；G：BOXChemi莱克实验动物有限责任公司，动物合格证号SCXKXL1．4化学发光成像系统(SYNGENE公司)；JY92．(沪)2007-0005。小鼠饲养温度(22±1)℃，相对湿Ⅱ超声波细胞粉碎机(宁波新芝生

7、物科技股份有限公司)。[收稿日期]2013-08-101．3动物处理雄性ICR小鼠，适应性饲养后，按【基金项目]教育部新世纪优秀人才计划(NCET一11—1054)；教育体重随机分为4组，即正常组、DB低、中、高剂量组部长江学者和创新团队发展计划(PCSIRT—IRT1071)(113，150，200mg·kg)，每组8只。禁食12h[通信作者]季莉莉，博士，研究员，博士生导师，Tel：(021)51322517，E—mail：lichenyuel307@126．com后，给予相应剂量的DB，给药体积20mL·kg一，其[作者简介]牛成伟，博士研究生，E+

8、mail：niuchengweil0@126．eom中DB用0．5