酶辅助法提取大青叶中总黄酮及抗氧化性研究-论文.pdf

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1、第二十九卷第六期楚雄师范学院学报Vo1．29NO．62014年6月JoURNALOFCI-IUXIONGNORMALUNIVERSlTYJun．2O14酶辅助法提取大青叶中总黄酮及抗氧化性研究崔旭，李会端(楚雄师范学院化学与生命科学学院，云南楚雄675000)摘要：本论文采用酶辅助法提取大青叶中的总黄酮，先用纤维素酶酶解，再用乙醇回流提取大青叶中总黄酮。分别固定乙醇提取液的浓度为70％，料液比为1：20g／mL，回流时间为2h。初步探究了纤维素酶浓度、酶解pH、酶解温度、酶解时间四个单因素对大青叶中黄酮提取率的影响。

2、设计正交实验确定酶辅助法提取大青叶中总黄酮的较佳条件为：纤维素酶浓度为4U／mL、酶解pH=4．5、酶解温度为40oC、酶解时间1．5h，总黄酮提取率高达2．85％。另外还研究了大青叶总黄酮提取液对羟自由基的清除活性，与BHT的抗氧化剂活性作对照实验，结果表明大青叶中的总黄酮对羟自由基有较强的清除活性。关键词：酶辅助法；大青叶；总黄酮；提取率；清除活性；羟自由基中图分类号：Q947．748．3文章标识码：A文章编号：1671—7406(2014)06—0046—07前言黄酮类化合物泛指两个苯环中间通过三个碳原子连接形

3、成的一系列化合物。黄酮类化合物具有显著地抗氧化、抗癌、消炎、杀菌、抗病毒和调节肌体免疫力等功效，是一类极具开发前景的天然药物。u植物中提取黄酮类化合物的方法主要有醇提法、碱提法、酶辅助法、超声波振荡提取等。[6由于植物细胞壁的束缚作用，使得总黄酮在提取过程中不易溶出。植物细胞壁是由纤维素、半纤维素和木质素等形成的致密结构。纤维素酶能将植物细胞壁的纤维素骨架逐级降解，进而增加细胞内活性成分的溶出，释放出黄酮。纤维素酶辅助法提取植物总黄酮，具有操作简单、提出率高等特点，已获得广泛关注。大青叶是十字花科菘蓝属植物，主要分布

4、在冀、豫、江、浙、皖等地区。大青叶性味苦寒，具有清热解毒、抗菌抗病毒、增强肌体免疫力等功效。_8文献中报道的从大青叶中分离得到的化合物有靛玉红、靛蓝、色氨酸、色氨酮、异牡荆素等。卑占宇、罗晓冰等人报道了超声波提取大青叶总黄酮，选择70％乙醇做提取剂，测得总黄酮提取率为4．26％。截至目前尚没有纤维素酶辅助法提取大青叶总黄酮的相关报道，本文初步探究纤维素酶辅助法提取大青叶总黄酮，设计单因素实验和正交实验确定了总黄酮提取的较佳条件，研究了大青叶总黄酮提取液对羟自由基清除活性。为大青叶总黄酮的开发利用及植物中总黄酮的提取提

5、供基础实验数据。1．材料与方法1．1原料、试剂与仪器大青叶(产地：昆明东郊凉亭凤凰山)购于楚雄同济堂。样品预处理：购买干燥的大青叶进行粗加工、恒温干燥、粉碎后置于干燥容器中备用。无水乙醇、芦丁标准品、氯化铝、纤维素酶、亚硝酸钠、硝酸铝、三氯化铁、氢氧化钠、锌粉、氨水、BHT，蒸馏水等。CP214c电子天平(灵敏度0．001mg)、DFY一500500克摇摆式高速中药粉碎机、HH—s2s恒温水浴锅、SHZ—IIIA真空泵、722型光栅分光光度计、10lC一2B型电热鼓风恒温干燥箱、回流及蒸馏装置、容量瓶、吸量管等。基金

6、项目：云南省应用基础研究项目(2o12v0o5o)；楚雄师范学院科学研究基金项目(11YJGG01)。收稿日期：2014—05—07作者简介：崔旭(1992一)，男，在读本科生。通讯作者：李会端(1983一)，女，河北宁晋人，讲师，博士，研究方向：滇中中药材黄酮类物质的提取及抗氧化活性。·46·楚雄师范学院学报2014年第6期崔旭，李会端：酶辅助法提取大青叶中总黄酮及抗氧化性研究1．2实验方法1．2．1总黄酮提取率的计算方法以芦丁标准液为对照，测定大青叶中总黄酮的提取率，加入5％亚硝酸钠溶液、10％硝酸铝溶液、4％氢

7、氧化钠溶液，在碱性条件下使总黄酮与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰，吸光度值与总黄酮浓度服从朗伯一比尔定律。根据标准曲线计算提取物中总黄酮的含量。将所测样品吸光度值代人线性回归方程求出提取液中总黄酮浓度，按下式计算总黄酮提取率：设样品中黄酮类化合物的含量为x，稀释以后的浓度为C；原提取液的浓度为C。。C×VCo×lOOm／L0000g—x1000州⋯％～2—．1．2．2总黄酮对羟基自由基的清除活性参照Fenton反应体系。利用H0与Fe混合后产生存活时间短、反应活性高的羟自由基(·OH)的性质，在反应

8、体系中加入能有效地捕捉·OH的水杨酸，并与其反应产生有色络合物，该络合物在510nm波长处有较强吸收峰。若体系中加入对·OH具有清除功能的黄酮类化合物时，便会与水杨酸竞争·OH，使有色络合物生成量减少。采用固定反应时间法，在510nm波长处测量含被测物反应液的吸光度，与空白液对照，测定被测物对·OH的清除作用。清除率计算公式：·OH清除率(％)