小鼠腹腔巨噬细胞的快速提取及培养.pdf

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1、·130·局解手术学杂志2015年第24卷第2期JREGANATOPERSURG，2015，V01．至．至小鼠腹腔巨噬细胞的快速提取及培养范仕郡，刘鑫，黄敏，王宁，郑江(第三军医大学西南医院中心实验室，重庆400038)[摘要]目的建立一种小鼠腹腔巨噬细胞快速提取的方法，为细胞实验提供便捷。方法用生理盐水灌洗小鼠腹腔，分离获取小鼠腹腔巨噬细胞，转入高糖DMEM培养液中培养。采用台盼蓝染色计算存活率，瑞氏染色计算纯度，倒置显微镜观察细胞形态。结果获得较高纯度的巨噬细胞，具备巨噬细胞的形态特征。结论本方法是

2、一种简便实用的提取小鼠腹腔巨噬细胞的方法。[关键词]BALB／c小鼠；巨噬细胞；提取；培养；鉴定[中图分类号]Q813．1[文献标识码]A[文章编号]1672-5042(2015)02-0130-02EstablishmentofarapidmethodfortheisolationofmurineperitonealmacrophagesFANShi-jun，LIUXin，HUANGMin，WANGNing，ZHENGJiang(CentralLaboratory，SouthwestHospital，

3、ThirdMilitaryMedi—calUniversity，Chongqing400038，China)Abstract：ObjectiveToestablisharapidmethodfortheisolationofmurineperitonealmacrophages．MethodsAbdominallavagewasperformedwithNSandtheperitonealmacrophageswaspurifiedfromthelavage，whichwaslatertransferr

4、edintohighglucoseDMEMcnl—turemedium．Cellviabilitywasmeasuredviathetypanbluestaining．PuritywasobservedviaWrightgstain．ResultsHighpuritymacropha—geswithtypicalmorphologywereobtained．ConclusionAsimpleandrealisticmethodwassetupfortheisolationofmurineperitone

5、almac—rophages．Keywords：BALB／cmice；macrophage；extraction；culture；identification巨噬细胞是一类重要的天然免疫细胞，来源于外京华阜康生物科技股份有限公司提供)、生理盐水、胶头滴管、周血中的单核细胞，具有吞噬降解细菌、释放炎症介75％乙醇、眼科剪、眼科镊、10mL一次性注射器、50mL离心管、台盼蓝、瑞氏染液、奥林巴斯IX71倒置显微镜、奥林巴斯质、介导炎性细胞趋化、抗原提呈等活性，在抗感染、抗E400显微镜、细胞培养箱等。肿瘤免

6、疫中发挥着非常重要的作用。因此研究巨1．2实验方法噬细胞的功能，对于深入理解机体免疫防御和免疫调1．2．1实验准备将眼科剪、眼科镊、胶头滴管高压灭菌；节机制具有重要意义。获取原代细胞是体外研究巨噬离心管辐照消毒；BALB／c小鼠3只禁食8h；实验前将超净台细胞功能的重要方法。巨噬细胞在肺、肝、脑等实质器紫外线消毒30min。官以及腹腔等空腔部位以不同的形式分布。国内外已1．2．2细胞提取将小鼠脱颈椎处死，并浸入75％乙醇中有不少文献报道从多种组织器官中成功分离和纯化巨10S。然后取出小鼠，沥干，将其仰卧

7、于不锈钢方盘上。用注射噬细胞。然而在实质脏器中的巨噬细胞，往往受到器吸6mL生理盐水液注入腹腔中，轻揉小鼠腹部2min，使液环境介质中各种理化和生物刺激因素的影响，已发生体在腹腔内充分流动。用眼科镊提起下腹皮肤，使动物微倾向炎性活化或产生了定向分化，为其体外研究造成了干一侧。剪开腹部皮肤后在肌肉层剪1个小口，用胶头滴管将腹腔液吸出转入离心管中。每只吸出量约为4～5mL。扰。而腹腔中存在大量静息状态的巨噬细胞，且腹腔1．2．3细胞培养在4℃条件下，将收集的腹腔灌洗液在中细胞种类较少简单，易于分离，是获取巨

8、噬细胞的常1000r／min条件下离心10rain，去上清，加入高糖DMEM细胞用部位-o。目前有关腹腔巨噬细胞的分离方法较为培养液用细胞计数板计数。显微镜下(10×100倍)计数巨噬复杂，且操作耗时较长。本方法在既往文献报道基础细胞。调整细胞浓度至所需，接种至细胞培养瓶，37℃培养箱上，对小鼠腹腔巨噬细胞提取方法加以改良，建立了一孵育4h，充分贴壁后，弃上清，除去非粘附细胞再加入高糖种更为简便实用的小鼠腹腔巨噬细胞的提取方法。DMEM细胞