小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定.pdf

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1、海南医学2014年lO月第25卷第19期HainanMedJ，Oct．2014，Vo1．25，No．19doi：10．3969／j．issn．1003—6350．2014．19．1109·论著·小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定张淑莉，李素芬。(1．西安医学院医学技术系检验中心，陕西西安710021；2．陕西省地方病研究所，陕西西安710003【摘要】目的建立一种小鼠腹腔巨噬细胞体外分离培养的简便方法。方法以无血清的RPMI1640培养液灌洗小鼠腹腔，分离获取小鼠腹腔巨噬细胞，在含有10％d~牛血清的RPMI1640培养液中培养。通过细胞形态学观察，台盼蓝染色计数细胞活力，瑞氏染色计算

2、纯度，细胞吞噬墨汁颗粒测定其吞噬率，鉴定这些细胞是巨噬细胞。结果本实验获得高纯度的巨噬细胞，具备巨噬细胞的形态特征。结论该方法是一种简便的巨噬细胞体外分离培养方法。【关键词】小鼠；巨噬细胞；分离培养；鉴定【中图分类号】R-332【文献标识码】A【文章编号】1003----6350(2014)l9___2814--o2Separation，cultivationandidentificationofmouseperitonealmacrophages．ZHANGShu-li，LISu-fen．J．TestingCenter,DepartmentofMedicalTechnology,X

3、i'anMedicalUniversity,Xi'an710021，Shaanxi,CHINA；2．EndemicDiseaseResearchl’li#uteofShaartxiprovince,Xi'an710003,Shaanxi,CHINA【Abstract】ObjectiveToestablishaconvenientmethodofseparationandcultivationofmouseperitonealmaerophages．MethodsAbdominalcavityweredouchedusingRPMI1640mediunwithoutserum，were

4、isolatedandobtainedmouseperitonealmaerophages，andthecellswereculturedinRPMI1640mediunwith10％fetalbovinese-rum．Thecellswereidentifiedbymorphologicalobservation，trypanbluestaining，Wright’Sstainingandphagocytosis．ResultsInthisexperiment,theobtainedwerehighlypurifiedmacrophageswi￡hmorphologiccharac

5、teristicsOfthemacrophageinorganism，favourablephagoeytosis．ConclusionThiswasasimpleandpragmaticmethodforsepara-tionandcultivationofmouseperitonealmacrophages．【Keywords】Mouse；Macrophages；Isolationandcultivation；Identification巨噬细胞是机体免疫系统的重要细胞成分，它在抗1．3小鼠分离、培养将小鼠颈椎脱臼法处感染、抗肿瘤和免疫调节中起着非常的重要作用n～1。巨死，用70

6、％酒精消毒小鼠腹部皮肤，然后让其仰卧位噬细胞来源于骨髓，它在机体中分布广泛，主要分布于四肢展开，固定于解剖板上，无菌条件下打开小鼠肝、脾、淋巴结、骨髓、胸腺、胸腔、腹腔、血液、皮肤等多种腹腔，用眼科镊提起下腹皮肤，剪一小口，并沿腹中组织器官。如何这些组织器官中分离、纯化获得高纯线剪开3～5cm长的腹部皮肤，充分暴露腹膜，向腹腔度、高活性的巨噬细胞，如何选择适当的细胞提取及鉴注射预冷的不含小牛血清的RPMI1640培养液5ml，定方法是体外细胞培养研究工作者的首要任务。本实注意进针勿过深，不要损伤内脏及血管，轻柔腹部约验以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，探索建立一种巨噬2～3min，静置5

7、min后用镊子提起腹膜，用吸管吸取细胞体外分离培养与鉴定的简便方法。腹腔灌洗液，并重复灌洗一次。将两次回收的的灌洗1材料与方法液4℃离心，所得细胞沉淀用预冷RPMII640培养液1．1主要试剂与仪器RPMI1640培养液，10％洗涤，l000r／min离心10min两次，弃去上清，将沉淀胎牛血清，瑞氏染液，台盼蓝染液，印度墨汁，二氧化细胞再加人预冷RPMI1640培养液(青霉素100U／ml、碳培养箱，倒置显微镜，TDL湘仪离心机。链霉素100lxg／ml