连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和no释放的影响

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1、连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响作者：尹乐乐,曾耀英,侯会娜【摘要】　　目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,GriessReagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响。结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的

2、促进作用(P<0.05)。不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05)。结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放。【关键词】连翘提取物腹腔巨噬细胞吞噬NO释放　　［Abstract］AIM:Toinvestigatetheeffectofforsythiasuspensa(FS)extractonphagocytosisofperitonealmacrophagesandNOproductioninvitro.METHODS:Theperitonealmacr

3、ophagesswereisolatedfromBALB/cmice.AfterstainedwithCFDASE,theDH5αwerecoculturedwithperitonealmacrophagessfor3h.TheeffectofFSextractoncytophagocytesisinvitrowasanalyzedbyflowcytometry.TheperitonealmacrophageswerestimulatedandactivatedbyLPSinvitro.TheeffectofFSextractonNO

4、productionoftheperitonealmacrophagesinvitrowasmeasuredbyNOassaykit.RESULTS:FCManalysisshowedthatFSextractsignificantlypromotedthephagocytosisofperitonealmacrophagesatthefinalconcentrationof40,80,160mg/L,respectively(P<0.05).ItalsodecreasedtheproductionofNOatdifferentcon

5、centrationinducedbyLPS(P<0.05).CONCLUSION:FSextractcanpromotephagocytosisofperitonealmacrophagesandinhibitNOproductioninvitro.　　［Keywords］forsythiasuspensaextract;peritonealmacrophages;phagocytosis;NOproduction　　连翘(forsythiasuspensa,FS)又名旱莲子、大翘子、落翘等,为木犀科植物连翘的果实。它作为传统中药广

6、泛应用于对炎症、发热和溃疡等方面的治疗［1］。同时,FS的主要活性成分连翘苷在抗氧化、抗菌、抗病毒和解热抗炎等方面［2］也起着重要的作用。本研究我们通过检测FS对小鼠腹腔内巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响,进一步研究其免疫学效应。　　1材料和方法　　1.1材料清洁级BALB/c近交系小鼠(雄性,8～10周龄,体质量20～22g)购自广东省实验动物中心。FS购自四川广汗市维康植化有限公司。L谷氨酰胺、β巯基乙醇、刀豆蛋白A(concanavalinA,ConA)购自Sigma公司。羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluoresceind

7、iacetatesuccinimidylester,CFDASE)购自美国MolecularProbes公司。RPMI1640、胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)为美国GibcoBRL公司产品。GriessReagent试剂盒为美国Promega公司产品。流式细胞仪(FACSCalibur)为美国BectonDickinson公司产品。　　1.2方法　　1.2.1小鼠腹腔巨噬细胞的制备和细胞培养断颈处死小鼠,用750mL/L乙醇消毒,腹腔注射RPMI1640完全培养液约5mL。用棉球轻揉腹壁1～2min后,收集腹腔液,1

8、500r/min离心10min,弃上清,用RPMI1640完全培养液(含100mL/L的FBS)调整细胞密度为2×109/L。根据需要接种于24孔(1mL/孔)或96孔(0.2m