连翘水提取物对小鼠s180肿瘤细胞和脾细胞体外增殖的影响

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1、连翘水提取物对小鼠S180肿瘤细胞和脾细胞体外增殖的影响：钟宇飞，雷林生，余传林，朱正光，李建军，吴曙光【摘要】　　目的观察连翘水提取物及其各化学部位对S180肿瘤细胞以及脾细胞体外增殖的影响，为进一步的研究提供依据。方法细胞增殖程度采用MTT比色法。结果连翘水提取物（Forsythiasuspensatotalex?traction,FSTE）及乙醇溶解部位（FSⅣa）具有较强的抑制S180细胞增殖的作用，其余部位的作用较弱或无;FSTE和FSⅣa对小鼠脾细胞的增殖有明显的抑制作用。结论连翘水提取物及其乙醇溶解部位对

2、小鼠S180肿瘤细胞和小鼠脾细胞的体外增殖有明显抑制作用。【关键词】连翘抗肿瘤化学部位免疫细胞免疫抑制　　Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofForsythiasuspensatotalextract(FSTE)andchemicalponentsoftheextractontheproliferationofmurineS180sarecellsandsplenocytesinvitrotoprovideevidenceforthefurtherstudy.MethodsCell

3、proliferationethylthiazolyltetrazoliumassay(MTT).ResultsFSTEanditsethanol?solubleextract(FSIVa)hadstronginhibitoryeffectonthegrourineS180sarecells,etherextract，aceticetherextract，ethanol?precipitatedextractshoousesplenocytesinvitro.ConclusionFSTEandFSIVahavemark

4、edinhibitoryeffectonthegroouseS180tumorcellsandsplenocytesinvitro.　　Keyor;chemicalponents;immunocyte,immunosuppression　　连翘是常用的传统中药之一，为木犀科连翘属植物连翘（Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl）的干燥果实。文献报道连翘具有抗炎、强心等作用［1-3］，其抗肿瘤作用近年来开始受到关注，有研究证实连翘乙醇提取物具有体内外抗肿瘤作用［4-6］。考虑到中药实际应用时往往采用水

5、煎剂，因此，本实验选取连翘的水提取物（Forsythiasuspensatotalextract,FSTE）进行抗肿瘤作用的研究，并对其石油醚（FSⅠ）、乙醚（FSⅡ）、乙酸乙酯（FSⅢ）、乙醇溶解（FSⅣa）和乙醇沉淀（FSⅣb）等化学部位进行了抗肿瘤活性的筛选。免疫在机体抗肿瘤方面发挥着重要的作用，为此，同时进行连翘水提取物及其抗肿瘤有效部位对小鼠脾细胞体外增殖影响的观察，以初步考察其对免疫功能影响，为进一步的研究提供实验依据。　　1实验材料　　1.1肿瘤细胞株　　小鼠S180肉瘤细胞由南方医科大学药学院药物研究所

6、冻存。　　1.2药材　　连翘购自肇庆市仁和医药公司，经肇庆医学高等专科学校药学系中药药剂师甘柯林鉴定为老翘。　　1.3主要试剂　　　　RPMI1640培养基为GIBCO公司产品；新生牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；四甲基偶氮唑盐（MTT）为Sigma公司产品；氟尿嘧啶注射液（5?FU）为上海旭东海普药业有限公司生产，批号为070702；其余试剂为国产分析纯。　　1.4主要仪器　　电子天平（上海上天公司，型号：FA2004）；高速冷冻离心机(美国杜邦公司，型号ST?21)；低速离心机（AndreasHetti

7、ch公司，型号：Universal16A）；连续波长酶标仪（Bio?RAD公司，型号：BenchmarkPlusTM）,CO2培养箱（Thermo公司公司，型号：5410）。　　1.5动物　　SPF级近交系BALB/c小鼠，雄性，8～10周龄，体质量（20±2）g，由南方医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2006?0015。　　2实验方法　　2.1连翘水提取物的制备　　取连翘原药材（生药）300g，加12倍蒸馏水3600mL煎煮1.5h，滤过，再加入蒸馏水3600mL煎煮1.5h，连续3次，

8、合并煎煮液，减压浓缩，定容为1g生药/mL，冰箱保存。此为连翘水提取物原液。实验时取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，用完全RPMI1640培养液稀释，使细胞培养时的终质量浓度分别为8，4，2，1，0.5，0.25mg/mL（相当生药量）。　　2.2连翘水提取物各化学部位的制备　　　　取连翘水提取物原液200mL，依次用石