小鼠睾丸间质细胞分离培养方法的研究进展.pdf

《小鼠睾丸间质细胞分离培养方法的研究进展.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、临与病理杂志，rC1iHPath0lRes2015,35(4)htp：／⋯／w⋯wW～．1c⋯b1_⋯ne“t—doi：10．3978／j．issn．2095-6959．2015．04．010Viewthisarticleat：http：／／dx．doi．org／lO．3978／j．issn．2095—6959．2015．04．010小鼠睾丸间质细胞分离培养方法的研究进展谢天承综述许云飞审校(同济大学附属第十人民医院泌尿外科，上海200072)[摘要】小鼠睾丸间质细胞是目前医学研究的常用细胞。高纯度的分离、纯化及体外培养小鼠睾丸间质细胞对于相关研究的开展至关重要。本文对目前常用的几种小鼠睾

2、丸间质细胞分离、纯化和体外培养方法以及各类方法的原理进行了综述。【关键词】小鼠；睾丸间质细胞；分离培养ResearchprogressinseparationandcultureofmouseleydigcellsXIETiancheng,XUYunfei(DepartmentofUrology,TenthPeople'sHospitalofTongjiUniversityjShanghai200072,China)AbstractMouseleydigcellisoneofthemostcommonexperimentalmaterialsincurrentresearch,SOtheh

3、ighlyeficientisolation，depurationandcultureinvitroofthecellhaveimportantsignificance．q-hispaperoverviewsthecurrentstatusofsomemethodsofisolation,depurationandcultureinvitrooftheleydigcells,andportraystheprincipleofthesemethodsrespectively．Keywordsmouse；leydigcell；separationandculture；睾丸间质细胞又称leydi

4、g细胞J，分布于睾丸的地位，其分泌的雄激素可促进精子的发生和男曲精小管之间的结缔组织中。睾丸间质细胞是分性生殖器官发育，以及维持男性第二性征和性泌雄激素的主要组织细胞，大约95％的雄激素由其功能。睾丸间质细胞还能分泌前列腺素等含氮物分泌n]，目前就大型哺乳动物及大鼠的睾丸间质细质，和睾丸组织中的其他细胞如支持细胞、生殖胞分离、纯化及体外培养介绍较多，而对小鼠的细胞等之间有着密切的关联l3J。当今男性和雄性相关报道及研究有限。本文就小鼠睾丸间质细胞生殖障碍的治疗和研究的重点集中在睾丸问质细的分离、纯化与体外培养进行综述。胞的研究上，因此建立起完善的睾丸间质细胞分离及体外培养体系对于开展相关研

5、究具有重要意1睾丸间质细胞的功能及其体外培养现状义。相关研究多用于药理学、生殖遗传学等领域研究。睾丸间质细胞的分离的重点难点在于高纯睾丸间质细胞在男性生殖健康中居于重要度的分离、纯化睾丸问质细胞，同时尽量减少对收稿日期(Dateofreception)：2014-12—23通信作者(Correspondingauthor)：许云飞，Emaihxuyunfeibb@sina．conl基金项目(Foundationitem)：国家自然基金项目(81370699)。qhisworkwassupportedbytheNaturalScienceFoundationofChina(81370699)

6、临床与病理杂志，2015，35(4)http：／／www．1cb1．net其的损伤，以避免给后续实验开展及研究结果带匀；再用600r／min离心2min，收集上清液，再往来影响。离心管中加适量培养液，吹打均匀，重复3～5次，即可得细胞悬液。2几种常用的小鼠睾丸间质细胞分离方法2．4．2低浓度胶原酶差速消化法_l无菌取出双侧睾丸，4℃预冷PBS冲洗3次，2．1过滤法[4-8]去除附睾、脂肪及结缔组织。显微器械解剖白成年小鼠脊髓脱臼法处死后，无菌取出双侧膜，去除肉眼可见的较大血管，保持睾丸组织完睾丸，在冰面上去除被膜和血管。用DMEM／F12整。PBs冲洗三次后，将睾丸组织转移至50mL培养液

7、漂洗，用镊子将睾丸实质轻轻拨散，加入离心管，加人5mL、0．03％胶原酶NB4，37℃、0．5g／LI型胶原酶，34℃水浴，振荡消化30rain，150r／min震荡消化15min，吸出上清液离心，以10％后用4倍培养液终止消化，用200目筛网过滤。后FBS的低糖DMEM接种。睾丸组织再次加入5mL、将滤液以转速l500r／min离心10rain，弃上清液。0．03％胶原酶以130r／min慢速振荡15min，完成第2次