原代人心包间质细胞的分离培养方法及鉴定-论文.pdf

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1、第二军医大学学报2014年5月第35卷第5期http：／／www．ajsrt~lTlu．c／'／AcademicJournalofSecondMilitaryMedicalUniversity，May2014，Vo1．35，No．5·论著·D0I：10．3724／SP．J．1008．2014．00500原代人心包间质细胞的分离培养方法及鉴定龚德军，吴洪玉扒，张锡武，袁扬，陶婧，陆方林，韩林，徐志云，刘晓红1．第二军医大学长海医院胸心外科，上海2004332．第二军医大学长海医院消化内科，上海200433[摘要]目的建立原代人心包间质细胞分离、培养方法。方

2、法将心包组织标本剪切成1mm×1mm×1mm大小，采用Ⅱ型胶原酶与透明质酸酶联合胰蛋白酶消化分离、培养获得细胞。观察细胞形态，测定细胞倍增时间，应用流式细胞术与免疫组织化学染色对细胞进行鉴定。结果分离培养的细胞接种24h后有细胞贴壁生长，i0d左右细胞融合，可进行传代培养。细胞呈梭形或纺锤样外观，细胞核明显、核仁清晰、核质比例大。流式细胞术检测显示细胞表面标记物CD34(～)、CD45(一)，免疫组织化学检测显示CK(一)、vimentin(+)、a—SMA(+)。10例心包组织采用上述方法分离培养细胞，其中8例获得成功。结论本方法可高效地分离、培养原代

3、人心包间质细胞，为缩窄性心包炎体外研究提供了途径。[关键词]心包间质细胞；细胞培养技术；缩窄性心包炎[中图分类号]R542．11[文献标志码]A[文章编号]0258—879X(2014)050500—05Isolation，cultureandidentificationofprimaryhumanpericardialinterstitialcellsGONGDe—jun，WUHong—yu，ZHANGXi—WU，YUANYang，TAOJing，LUFang—lin，HANLin，XUZhi—yunLIUXiao—hong1．Departmentof

4、CardiothoracicSurgery，ChanghaiHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China2．DepartmentofGastroenterology，ChanghaiHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China[Abstract]ObjectiveToestablishamethodforisolation，cultureandidentificationofprimaryhumanp

5、ericardialinterstitia1cells(PICs)．MethodsHumanpericardialtissueswerecutinto1mm×lmm×1mmsizedpieces，digestedwithtypeⅡcollagenase，hyaluronicacidenzymeandtrypsintoisolatetheinterstitialcells．Theceilswereculturedandcellmorphologywasobserved．Thecelldoublingtime，flowcytometryandimmunohi

6、stochemicalstainingwereappliedforcellidentification．ResultsAdherentcellswereobserved24hafterculturing．Thecellsreached8Oconfluencesandcouldbesubculturedafterabout10days．Thecellsisolatedandculturedwerefibroblast—likeorspindle—like，withobviousnuclei，clearnucleolus，andagreaterproport

7、ionofnucleusandcytoplasm．FlowcytometryresultsshowednocellsurfacemarkersCD34andCD45．ImmunocytochemistryshowednegativeCKstaining，andpositivevimentinand—SMAstaining．Cellsisolatedfrom8ofthe10pericardialtissuesweresuccessfullycultured．ConclusionThepresentmethodcaneffectivelyisolateand

8、cultureprimaryhumanPICs，whichlaysafounda