限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切条件的优化-论文.pdf

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1、第35卷第4期吉林医药学院学报Vo1．35No．4．——250．-——2014年08月JournalofJilinMedicalCollegeAug．2014，文章编号：1673-2995(2014)04-0250-04·论著·限制性内切酶gp／zI和oI双酶切条件的优化朱杭飞，姜晓明，藏雨轩，张霎乔，向国艳，张中新，郝峰(吉林医药学院：1．生物化学检验教研室，2免疫教研室，吉林吉林132013)摘要：目的探讨nI和EcoRI双酶切的优化条件。方法nI和oI不同的酶切体系，酶切含有上述两种限制性内切酶

2、酶切位点的载体pEGFP—Ano2，DNA琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，以获取nI和EcoRI双酶切的优化条件。结果50L酶切体系，nI和EcoRI双酶切的适宜条件：首先在1×L缓冲液情况下，应用1IxLnI酶切1Ixg质粒1h，再加入1×H缓冲液和0．01％BSA，应用1IxLoI继续酶切1h。结论获取nI和EcoRI双酶切质粒的适宜条件，为今后应用KpnI和EcoRI双酶切实验提供科学的参考依据。关键词：nI；EcoRI；双酶切；优化；DNA琼脂糖凝胶电泳中图分类号：Q一33文献标识码：ATheop

3、timizationofCO-digestionconditionsbyKpnI／EcoRIZHUHang—fei，JIANGXiao—ming，ZANGYu．xuan，ZHANGYun—qiao，XIANGGuo—yan，ZHANGZhong—xin，HAOFeng(1．DepartmentofBiochemistryLaboratory，2．DepartmentofImmunology，JilinMedicalCollege，JilinCity，JilinProvince，132013，China

4、)Abstract：0bjectiveToinvestigatetheoptimumconditionsofCO—digestionbynI／EcoRI．MethodsDifferentdigestivesystemswereselectedtodigestpEGFP—Ano2，containingthe凡I／EcoRI，thenDNAagarosegelelectro—phoresiswasusedandenzymedigestionresultswereobservedtogettheopIimu

5、mconditions．ResultsTheoptimumconditionsofCO-digestionby^，pI／EcoRIinthe50Lsystemsappearsbelow：first，inthepresenceofthe1×Buff-erL，1IxLKpnIdigesting1Ixgplasmidfor1h，then1IxLEcoRI，0．01％BSAand5L10×BufferHwereaddedtoenzymedigestionfor1h．ConclusionTheoptimumco

6、nditionsofCO—digestionbynI／EcoR1weregotinoursystems，whichprovidedthebasisfortheCO—digestionbyI／EcoRIinthefuture．Keywords：KpnI；EcoRI；co-digestion；optimization；DNAagarosegelelectrophoresis限制性核酸内切酶是一种可以识别DNA的特异应用于载体构建等分子生物学实验，因为单酶切后连序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类

7、接目的基因理论上会出现50％可能的错误性，而双内切酶¨。约翰霍普金斯大学的丹尼尔·那森斯、酶切后的不同黏性末端在一定程度上避免单酶切的汉弥尔顿·史密斯与伯克利加州大学的沃纳·亚伯不足。nI和EcoRI是目前常用的限制性内切因为限制性内切酶的发现与研究而获1978年度的诺酶，属第Ⅱ型限制性内切酶，来源方便、价格便宜，广贝尔生理学奖，开创了分子遗传学的新篇章J。目泛应用于分子生物学实验。试剂公司会给出这两前，限制性内切酶的酶切技术因其操作简单和快速等种酶的适合缓冲液，但这两种限制性内切酶的最适缓优点广泛应

8、用分子生物学等领域。双酶切更为广泛冲液离子浓度相差较大，给这两种酶的应用带来一定不便。本研究选取nI和EcoRI不同的酶切体系，基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(2013-351)；吉探讨nI和EcoRI双酶切的适宜实验条件，为今后林省大学生创新创业训练计划856号；吉林医药学院大学应用nI和EcoRI双酶切实验提供科学的参考依生科研项目(2012-12)．作者简介：朱杭飞(1993一)，女(汉族)，本科在读．据。通讯作者：郝峰(1973