顺铂耐药卵巢上皮性癌细胞株及其裸鼠移植瘤模型的建立及耐药特性探讨-论文.pdf

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1、中华妇产科杂志2014年7月第49卷第7期ChinJObstetGynecol，July2014，Vo1．49，N0．7·523·．基础研究．顺铂耐药卵巢上皮性癌细胞株及其裸鼠移植瘤模型的建立及耐药特陛探讨石丽君于红静张玮李力王琪【摘要】目的建立顺铂耐药性稳定的卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞株及其裸鼠移植瘤模型并探讨其耐药特性，为研究体内微环境耐药机制及逆转靶基因筛选奠定基础。方法采用体内外交叉诱导和连续体内诱导两种方法，以绿色荧光蛋白(GFP)标记的卵巢癌细胞株SKOV3／GFP分别建立两株顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV3／DDPI(为耐药细胞的对照)和SK

2、OV3／DDPⅡ及其裸鼠移植瘤模型。采用四甲基偶氮唑蓝(M，rr)比色法和流式细胞仪检测细胞耐药指数，流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期比例，高效液相色谱仪检测细胞内顺铂积量；透射电镜观察移植瘤组织的超微结构，实时荧光定量PCR技术检测移植瘤组织中铂类耐药相关基因——EN、STAT5、XIAP、BRCA1和MDR1mRNA的表达水平。结果成功构建顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3／DDPI和SKOV3／DDPlI及其裸鼠移植瘤模型。MTF比色法和流式细胞仪检测显示，SKOV3／DDPII细胞的耐药指数分别为2．83+0．12和3．82~0．19，SKOV3／D

3、DPI细胞的耐药指数分别为2．20~0．16和3．40~0．20，两种检测方法分别比较，差异均有统计学意义(P<0．05)。流式细胞仪检测显示，29．7和39．6IxmoULJl~fl处理36h后，SKOV3／DDPI、SKOV3／DDPII细胞的凋亡率『分别为(57．0±1．4)％、(74．4~2．3)％和(37．6±4．4)％、(50．5~3．4)％】均显著低于SKOV3／GFP细胞【(83．1~2．7)％和(87．4~4．0)％；P=0．024，P=O．0011，且SKOV3／DDPII细胞的凋亡率明显低于SKOV3／DDPI细胞(P=0．020)；

4、SKOV3／DDPI、SKOV3／DDPI1细胞GdM期比例与顺铂处理时间(为0、12、24、36和48h)呈正相关(=O．800，P=O．104；R=0．915，P=O．029)。高效液相色谱仪检测显示，以9．9、19．8、29．7和39．6Ixmol／L的顺铂分别处理12、24、36和48h后，SKOV3／DDPI、SKOV3／DDPI1细胞内顺铂积量均显著低于SKOV3／GFP细胞(P<0．05)。透射电镜观察，接种SKOV3／GFP细胞的裸鼠移植瘤组织中，在腹腔内注射顺铂(为4mg／kg)5次后，大部分细胞器降解，细胞核膜不完整；而接种SKOV3／

5、DDPII细胞的裸鼠移植瘤组织中，在腹腔内注射顺铂8次后才出现细胞器降解。实时荧光定量PCR技术检测显示，腹腔内注射顺铂8次后，接种SKOV3／DDPII细胞的裸鼠移植瘤组织中PTENmRNA的表达水平明显低于接种SKOV3／GFP细胞者(P=0．002)；STAT5、XIAP和BRCA1mRNA的表达水平明显高于接种SKOV3／GFP细胞者(P<0．05)；而MDR1mRNA几乎均无表达。结论本研究建立的顺铂耐药细胞株SKOV3／DDPI1具有稳定的耐药性。接种SKOV3／DDPII细胞的裸鼠移植瘤组织过度表达BRCA1、XIAP、STAT5mRNA，促

6、进细胞DNA损伤修复、降低细胞凋亡、促进细胞增殖，而低表达PTENmRNA~[]减弱了对细胞增殖的抑制作用，符合临床上铂类耐药细胞的耐药机制。【关键词】卵巢肿瘤；顺铂；抗药性，肿瘤；细胞系，肿瘤；疾病模型，动物Establishmentandbiologicalcharacteristicsofaplatinum—resistancenudemousemodelinepithelialovariancancerShin，YuHongfing,ZhangWei,LiLi,WangQi．MinistryofEducationKeyLaboratoryofEaP

7、reventionandTreatmentforRegionalHighFrequencyTumor,AfiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021，ChinaCorrespondingauthor：WangQi，Email：qi_catcat@163．comDOI：i0．3760／cma．j．issn．0529—567x．2014．07．010基金项目：国家高技术研究发展计划(2O12AA02A507)；广西科技基础条件平台建设项目(10．108．19)；广西医学科学实验中心开

8、放基金(KFJJ2O10—3)作者单位：530021南宁，广西医科