细胞角蛋白19m RNA检测在大肠癌患者外周血转移检测中的应用.pdf

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1、《现代仪器与医疗》2015年第21卷第1期细胞角蛋白19mRNA检测在大肠癌患者外周血转移检测中的应用李记彬胡秀芬刘放宋纯(1．辽宁省肿瘤医院大肠外科，辽宁沈阳110042；2．辽宁省肿瘤医院肝胆胰外科，辽宁沈阳110042)【摘要】目的：研究细胞角蛋白19mRNA检测在大肠癌(CRC)患者外周血转移诊断中的应用价值。方法：选取我院2011年2月至2014年3月大肠癌患者共计126例进行RT．PCR检测，另选40例大肠良性疾病患者与4O例健康献血者进行对照，采取荧光定量逆转录．聚合酶链反应(FQ—RT—PCR)

2、测定其CK19mRNA含量。并分析CK19mRNA在肿瘤回流血中的表达。结果：40例健康者1例CK19mRNA阳性表达，40例结肠良性疾病患者均为阴性；126例患者CK19阳性例数74例，阳性表达率为58．73％，与健康组和良性组比较有显著统计学意义(P<0．05)；CK19阳性表达与性别、年龄、细胞分化类型无明显相关(P>0．05)，与淋巴结转移有明显相关性(P<0．05)，同时Dukes分期c、D期患者阳性检出率明显高于A．B期患者(P<0．05)。结论：CK19mRNA检测应用于大肠癌患者外周血转移诊断有

3、较高的价值，可以为肿瘤转移和复发诊断提供重要依据。[关键词】细胞角蛋白19；大肠癌；外周血转移；应用中图分类号：R735．3文献标识码：A文章编号：2095—5200(2015)01—055—02D0I：1O．11876／mimt201501019细胞角蛋白(CK)属于多基因家族，包含有20别、年龄等基线资料差异无统计学意义(P>0．05)，多个不同亚类分子，主要表达集中在上皮细胞，同时具有可比性。可以不断分泌进入到外周血中，因此可以将外周血特1_2一般方法异性上皮性基因的异常表达作为检测上皮性恶性肿1_2_1

4、RNA提取分别抽取大肠癌患者、健康志瘤细胞的重要指标]。CK20mRNA已成为膀胱癌、愿者及结肠良性疾病患者外周静脉血5mL，并采用乳腺癌、大肠癌的血行转移依据】，本次研究主要枸橼酸钠抗凝，对单个核细胞采取淋巴细胞分离液围绕大肠癌患者外周血转移诊断中CK19mRNA的表进行分离，保存到离心管，持续5min离心每分钟达，分析其对大肠癌转移诊断的临床意义。12000r，然后将TrizollmL加入并使其均匀，后加200L氯仿并混匀，离心15min，每分钟12000r，1资料与方法吸取上清放置到离心管中加入500L异

5、丙醇混合均1．1一般资料匀，离心10min，每分钟12000r，然后使用75％乙研究选取的126例大肠癌患者均为2011年2月醇进行1次漂洗，放置待干，添入DEPC水30L，至2014年3月在我院接受住院治疗的病例，其中男对RNA进行溶解，同时依靠紫外分光光度计对RNA性占84例，女性42例，年龄范围32～84岁，平均的纯度以及浓度进行测定[5-7]。年龄(57．9±3．2)岁，Dukes分期：A期30例、B1．2．2逆转录合成cDNA与PCR扩增取总RNA期26例、C期48例、D期22例；细胞分化程度：于70

6、℃变性5min后沐浴，根据每个反应将RT反高分化36例、中分化64例、低分化26例；组织学应液18L逆转录酶(M．MLV)1L(5U／L)，类型：结肠癌72例，直肠癌52例。同时选取40例RNA酶抑制剂(RNasin)lL(40U／L)，将变性健康献血者(健康组)和40例结肠良性疾病患者RNA5L加入，水浴30rain，温度37℃，95℃变性(良性疾病组)进行对比。健康组：男性20例，女性5min。PCR扩增根据每个反应将43L反应液加入，20例，年龄范围29～70岁，平均年龄(48．7±3．3)Taq酶25U

7、／L)，RT反应产物5L。反应条件：岁；良性疾病组：男性20例，女性20例，年龄范围预变性为95℃5min，95oC30s，62oC20s，72℃20s．30～72岁，平均年龄(50．1±2．9)岁。三组患者性40个循环。72℃延伸10min。同时以标准cDNA为通讯作者：宋纯，硕士，主任医师，从事肠肿瘤外科临床，Emai1：1jb一1iJibing163．tom阳性对照，无菌水为阴性对照。等优势。1．3统计学方法本研究应用PCR技术检测外周血中CK19表达。采用x检验，P<0．05时有统计学意义。结果健康体检

8、者中出现1例阳性表达者，原因有待进一步研究，良性组均无阳性表达。显示126例外周血2结果CK19mRNA阳性检出率为58．73％。相关性分析可见2．1健康组、结肠良性组外周血CK19mRNA表达Dukes分期及淋巴结转移与外周血中CK19表达率相40例健康者1例CK19mRNA阳性表达，40例关。C、D期的阳性检出率明显高于A、B期，提示C、结肠良性疾病患者均为阴性。D期大肠癌预后不良