石蜡切片免疫荧光法在肾病穿刺组织中的应用.pdf

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1、北京大学学报(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Vo1．43No．6Dec．2011·技术方法·石蜡切片免疫荧光法在肾病穿刺组织中的应用张燕，陈剑，刘海静，陆敏(北京大学基础医学院病理学系，北京100191)[摘要]目的：探讨石蜡切片免疫荧光法检测肾病穿刺组织中免疫球蛋白等指标的最佳实验条件。方法：收集北京大学基础医学院病理学系的肾病穿刺组织标本45例，包括IgA肾病20例、膜性肾病15例、膜型乙肝病毒相关性肾炎10例，将组织标本用10％(体积分数)中性甲醛溶液固定、石蜡包埋、组织切片，在

2、不同的抗原修复条件和抗体结合时间下，分别标记IgG、IgA、HBsAg、HBcAg，观察染色结果，并与其新鲜组织的免疫荧光染色结果相比较，评判石蜡切片免疫荧光法的应用价值。结果：热诱导抗原修复法修复后一步法和二步法染色均为阴性；蛋白水解酶消化法中胰蛋白酶优于胃蛋白酶，并以胰蛋白酶消化30rain、IgG和IgA37℃温箱孵育90min、HBsAg和HBcAg二抗37℃温箱孵育150min染色结果最佳，与新鲜组织标本染色强度接近或略弱一些，阳性表达的方式也与后者相同，符合率100％。结论：经胰蛋白酶消化的石蜡切片免疫荧光法能够较好地应用于。肾病穿

3、刺组织诊断。[关键词]荧光抗体技术；石蜡；活组织检查；肾脏病学[中图分类号]R692[文献标志码]A[文章编号]1671—167X(2011)06-0900-03doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2011．06．023UseofparafinsectionsforimmunofluorescencestaininginrenalbiopsyZHANGYan，CHENJian，LIUHai．jing，LUMin(DepartmentofPathology，PekingUniversitySchoolofBasicMedic

4、alSciences，Beijing100191，China)ABSTRACTObjective：Toexplorethebestmethodfordetectingimmunoglobulin，HBsAgandHBcAginformalin—fixedparaffin—embeddedrenalbiopsytissuesbyimmunofluorescenee(IF)．Methods：Inthestudy，45casesofrenalbiopsywerecollected．including20casesofimmunoglobulinA(I

5、gA)nephropa—thy．15casesofmembranousnephropathyand10casesofmembranoustypehepatitisBvirusassociatednephritis．IgG，IgA，HBsAgandHBcAgdepositionswereevaluatedinthesecasesbyIFwithdifferentantigenretrievalmethodsanddifferentperiodsofantibodyincubationtime．TheresultswerecomparedwithI

6、Fonfrozentissuesfromthesamesetofcasestoevaluatethemethodology．Results：A11thecaseswerenegativewithheat．inducedepitoperetrievalalone．Immunoglobulin．HBsAgandHBcAgweremorereadilyidentifiableafterdigestionwithtrypsinthanwithpepsin．IgGandIgAwerebestvisualizedafter30minofdigestionw

7、ithtrypsinand90minofincubationwithprimaryantibodyforIgGandIgA．HBsAgandHBcAgwerebestvisualizedafter30minofincubationwithprimaryantibodyand150minofincubationwithsecondaryantibody．Comparingimmunoglobulins．HBsAgandHBcAgonfreshsectionsandpar舶nsections．theirvisualizationswerealmos

8、tidenticalwithbothtechniquesalthoughthesignalonparaffinsectionswasslightlyw