生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1从而负调控细胞因子分泌.pdf

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1、194ChinJCellMolImmuno1)2015，31(2·论著·文章编号：1007—8738(2015)02—0194—05生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1从而负调控细胞因子分泌何璐一，游晓星，李国华。，曾焱华，李冉辉，朱翠明，余敏君，吴移(南华大学附属第一医院妇产科，南华大学医学院病原生物学研究所，特殊病原体防控湖南省重点实验室，南华大学心血管病研究所，湖南衡阳421001)[摘要]目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1(HO一1)，从而影响细胞因子的产生。方法体外培

2、养胎盘滋养层细胞，用0．5—5mLLAMP作用4～12h。实时定量PCR和Westernblot法分别检测HO一1mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子2(Nr￡2)的核转位；2，7一二氯二氢荧光黄二乙酸酯(H：DCFDA)检测活性氧(ROS)产生；采用N．乙酰半胱氨酸(NAC)或Nrf2siRNA处理滋养层细胞，观察其对HO·1表达的影响。采用HO一1的激动剂钴原卟啉(CoPP)，抑制剂锌原卟啉(ZnPP)或HO一1siRNA处理细胞，ELISA检测处理前后LAMP对诱导肿瘤坏死因子(TNF．oL)和白细胞介素1p(IL．1p)分泌的影响。结果LA

3、MP能诱导滋养层细胞HO·1mRNA和蛋白表达，并能诱导其产生ROS以及促进Nrf2核转位。ROS抑制剂NAC预处理后，可明显降低HO一1的表达水平以及细胞核内Nd2含量。同时，Nrf2siRNA转染后，HO．1表达显著减少。采用ZnPP处理滋养层细胞，或RNA干扰HO一1表达后，可促进LAMP诱导滋养层细胞分泌TNF—ot和IL．1B，而CoPP处理能进一步降低TNF—ot和IL-1B水平。结论LAMP能通过ROS／Nrf2诱导滋养层细胞表达HO一1，从而抑制细胞因子的过度分泌。[关键词]生殖支原体；脂质相关膜蛋白；血红素氧合酶-1；滋养层细胞【中

4、图分类号]R518．9，R392-33，R711．32【文献标志码]AMycoplasmagenitalium·-derivedlipid--associatedmembraneproteinsnegativelyregulatecytokinesecretionbyinducingHO·1expressioninplacentaltrophoblastcellsHELu一，YOUXiaoxing，LIGuohua。，ZENGYanhua，LIRanhui，ZHUCuiming，YUMi~un，WUYimouDepartmentsofGynecolo

5、gyandObstetrics，FirstAffiliatedHospital，。InstituteofPathogenicBiologyMedicalCollege，HunanProvincial，KeyLaboratoryforSpecialPathogensPreventionandControl，InstituteofCardiovascularDisease，UniversityofSouthChina，Hengyang421001，ChinalAbstractJobjectlveToobservetheexpressionofhemeox

6、ygenase-1(HO一1)inregulationofcytokinesresponseinducedbyMycoplasma9enitalium-derivedlipid—associatedmembraneproteins(LAMPs)inplacentaltrophoblastcells．MethodsPlacentaltrophoblastcellswerecultured／nvitroandstimulatedby0．5—5．g／mLLAMPsfor4to12hours．ExpressionofHO-1mRNAandprotein，an

7、dnucleartranslocationofnuclearfactorerythroid-2relatedfactor2(Nrf2)weredetectedbyreal-timequantitativePCRandWesternblotting，respectively．Theintracelularformationofreactiveoxygenspecies(ROS)wasdetectedbythefluorescentprobeH2DCFDA．N-acetyl-cysteine(NAC)andnuclearfactorerythroid-2

8、relatedfactor2(Nrf2)siRNAwererespectivelyusedtoanalyze