牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL-1β表达的分子机制研究.pdf

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1、第37卷第6期中国预防兽医学报Vo1．37．No．62015年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．2015doi：10．3969~．issn．1008-0589．2015．06．09牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL一1I3表达的分子机制研究刘素丽，汪洋，李媛，周玉梅，高利萍，邵佳日1,2，王琪，陈莹，辛九庆(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物支原体病研究室，黑龙江哈尔滨150001；2．吉林农业大学动物科学技术学院，

2、吉林长春130118；3．东北农业大学资源与环境学院，黑龙江哈尔滨150030；4．东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要：为研究牛支原体(M．bovis)~其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL．1B表达的分子机制，本研究首先以Mboris及其LAMPs刺激EBL细胞，利用荧光定量PCR检测细胞因子IL．113的动态变化；然后将融合表达的细胞p65(RelA)蛋白和绿色荧光蛋白重组质粒pEGFPp65转染EBL细胞，以LAMPs刺激EBL细胞，通过激光共聚焦观察p65的亚细胞分布。荧光

3、定量PCR结果显示，M．bovis及其LAMPs能够诱导EBL细胞IL．1B的表达；而且LAMPs作用的最佳剂量为2ixg／mL，最佳时间为12h。同时，激光共聚焦试验检测到LAMPs能够诱导p65进入EBL细胞核中。上述实验结果表明LAMPs能够诱导EBL细胞中p65进入细胞核内，从而激活NF．KB信号通路，诱导IL．1B上调表达。关键词：牛支原体；脂质相关膜蛋白；胎牛肺细胞；NF．KB信号通路；IL．1B中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：1008．0589(20／5)06—0444．04Theexpre

4、ssionofIL·113inembryonicbovinelungcellsinducedbyMycoplasmabovisanditslipid—associatedmembraneproteinsLIUSu—li，WANGYang，LIYuan，ZHOUYu-mei，GAOLi—ping，SHA0Jia—ri，WANGQi。，CHENYing4，XINJiu-qing(1．DivisionofMycoplasmaDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechonlogy，

5、HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofAnimalScienceandTechnology，JilinAgricultureUniversityChangchun130118，China；3．CollegeofResourcesandEnvironment，NortheastAgricultureUniversity，Harbin150030，China；4．C

6、ollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgricultureUniversity，Harbin150030，China)Abstract：InordertostudythemolecularmechanismoftheexpressionofIL一1pinembryonicbovinelung(EBL)cellsinducedbyMycoplasmabovisanditslipid—associatedmembraneproteins(LAMPs)，thedynamicexpression

7、ofIL一1Bwasinitiallyexaminedbyreal—timePCR．Then，therecombinantplasmidpEGFP-p65wastransfectedintoEBLcellsstimulatedwithLAMPsandthesubcellularlocalizationofp65wasanalyzedusingconfocallasermicroscopy．Resultsofreal—timePCRshowedthatMbogisanditsLAMPswereabletoinducethee

8、xpressionofIL一1BinEBLcells，andtheoptimumconcentrationandtimeofLAMPswere2txg／mLand12hours．p65wastranslocatedintothenucleusofEBLcellsvisualizedviaconfocal