浅论人源化抗体的制备技术.pdf

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1、2010年4月江苏教育学院学报(自然科学)Apr．，2010第26卷第4期Joum~ofJiangsuInstituteofEducation(NaturalSciences)VoI．26No．4浅论人源化抗体的制备技术徐舒(中国药科大学生命科学与技术学院，江苏南京211198)[摘要]抗体对免疫治疗具有重要作用．人源化抗体是指抗体的可变区部分由人类可变区基因所编码的抗体，代替鼠源抗体，避免用于人体时所造成的HAMA反应或其他并发症．用基因重组方法制备人源化抗体的技术为抗体药物的未来奠定了坚实的基础．其中，大容量噬茵体抗体库技术的不断改进使得快速高通量的不经免疫即可获得

2、各种特异性抗体成为可能，为抗体药物的重新兴起带来了新的希望．[关键词]抗体；人源化抗体；噬茵体抗体库；大容量抗体库[中图分类号]R945[文献标识码]A[文章编号]1671—1696(2010)04—0034—06人源化抗体的制备技术有一个漫长的发展过抗体药物用于治疗人类疾病，已有一百多年的程，总结和梳理其技术的历史变迁，有助于我们探讨历史．在l9世纪末，人们发现抗血清能中和细菌毒抗体制备技术的规律，树立人类战胜疾病的信心．素．于是用免疫动物的血清预防治疗某些感染性疾病．到20世纪20年代末至30年代初，开始用抗血清一、抗体的抗病毒作用机制制剂治疗白喉、猩红热、麻疹等疾

3、病，抗体治疗达到抗体是人体重要的防御屏障，它在病毒感染早一个兴盛时期．但由于异源血清的应用会引起严重期和从感染靶细胞释放出杀细胞病毒时期起着重要的毒副作用，使得抗生素治疗一度取代了抗体治疗．作用，其主要作用途径如下：’幸运的是，某些无药可医的疾病仍需依赖某些抗体(1)中和抗体与病原体的表面抗原相结合，阻制剂——抗毒素、抗病毒抗体制剂．因此，抗体及其止它们进入易感细胞和组织．制备技术的研究得以延续下来，并经历了多克隆抗(2)调理作用抗体与病毒结合后，可促进吞噬体、单克隆抗体以及基因工程抗体阶段，逐渐进入一细胞对病毒颗粒的吞噬作用．个新的境界．(3)补体激活通过抗原-抗体复

4、合物或病原体一制备抗体的传统经典方法是，将抗原免疫动物抗体复合物激活补体诱导炎症反应，并吸引吞噬细以后获得抗血清，称为多克隆抗体，即第一代抗体．胞和血清抗体进人感染位点，进行下一步反应；另一这种方法均～性差、交叉反应多、不安全，无法在体方面，通过经典途径和旁路激活途径形成攻膜复合内大规模应用．体，最终导致感染细胞的裂解．7O年代中期通过老鼠的B淋巴细胞杂交瘤技术(4)抗体依赖的细胞介导的溶细胞效应(ADCC)产生了第二代单克隆抗体，此种抗体性质均一、特异单核细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞通过其表面性强、容易生产，现已在科学研究及其临床诊断中发分FcTR与抗体分子的Fc段

5、相结合，从而结合在感挥重要作用．但鼠源性单克隆抗体(McAb)在人体内染细胞的表面，发挥杀伤作用．会引发人抗鼠抗体反应，且不能有效激活人体生物效应，半衰期短，因而限制了其治疗性体内应用．二、抗体制备的历史[收稿日期]2009—12—21[作者简介]徐舒(1988一)，女，江苏南京人，中国药科大学，理学士·-——34-·———自8O年代中期开始尝试以基因工程方法改造从人外周血、脾或骨髓淋巴细胞提取总RNA，利用逆抗体，对鼠McAb进行人源化，包括恒定区人源化的转录．多聚酶链反应(RT．PCR)方法扩增抗体的全套人一鼠嵌和抗体和可变区人源化的改型抗体．对小可变区基因，经随机

6、组合后转染大肠杆菌，通过噬菌分子抗体已进行了大量研究，因其分子量小，免疫原体表面展示技术，把抗体Fab段或单链抗体表达在性低，穿透力强，如Fab、ScFv、DiaBody、MiniBody等噬菌体表面，构建人源抗体库J(’．噬菌体抗体可抗体的功能片段，可作“导向载体”等应用于人体．以将基因型和表型统一于一体，具有强大的筛选能90年代初出现了噬菌体抗体库技术，该技术具力，因为能将选择能力和扩增能力偶联起来，故能够有在体外模拟体内抗体生成的能力，是一个简单易在体外模拟体内的抗体生成过程．在免疫系统内的行高效的抗体制备手段．噬菌体抗体库解决了人源可变区发生重排后，B细胞被刺激

7、形成，每个B细胞抗体制备的问题，又使抗体性能的改良进入了新阶为一个克隆，一特异的抗体分子在其表面呈现．库中段，可以筛选具有特定性能的未知结构，优化抗体结每个噬菌体表达一种特异性抗体，相当一个B细胞．构、提高抗体的高通量表达等，成为抗体技术发展史近l0年来，对噬菌体展示的抗体片段的研究取得了上的里程碑．很多成果．理论上讲，任何抗原都可从天然抗体库中筛选到相应抗体，得到的抗体可用于各种疾病的诊鼠源抗体的人源化技术、抗体库技术和转基因断和治疗．鼠技术已成为人源化改造和人源抗体制备的三大支该技术在体外模拟了多样性的B细胞群体、克柱技术．现在进入临