微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F（ab′）2片段的制备.pdf

《微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F（ab′）2片段的制备.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、江苏农业学报(JiangsuJ．ofAgr．Sci．)，2010，26(3)：641～64464l纪炜，刘媛，刘贤进．微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F(ab)片段的制备[J]．江苏农业学报，2010，26(3)：641-644微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F(ab)2片段的制备纪炜，文4媛，支0贤进(1．南京农业大学植物保护学院，江苏南京210095；2．江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所，江苏南京210014)摘要：为制备微囊藻毒素(MCYST—LR)多克隆抗体F(ab)片段的方法。采用ProteinG亲和柱纯化微囊藻毒素多克隆抗体，经木瓜蛋白酶在温和条件下酶

2、切抗体，利用DEAE-52离子交换树脂柱分离抗体酶切片段，获得F(ab)片段。SDS—PAGE分析表明，MCYST—LR多克隆抗体得到有效纯化，木瓜蛋白酶酶切后出现明显F(ab)，片段的对应谱带；利用紫外分光光度计法测得F(ab)片段的产率为30．6％。采用木瓜蛋白酶法成功制备了MCYST—LR多克隆抗体的F(ab)，片段。关键词：多克隆抗体；木瓜蛋白酶；离子交换色谱；F(ab)，片段中图分类号：X703．1文献标识码：A文章编号：1000-4440(2010)03-0641-04PurificationofPolyclonal-antibodiesagains

3、tMicrocystin-LRandPrepara-tionofF(ab)2FragmentsJIWei，LIUYuan，LIUXian-jin(1．CollegeofPlantProtection，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China；2．InstituteofFoodQualitySafetyandDetection，JiangsuAcade—myofAgriculturalSciences，Nang210014，China)Abstract：Thepolyantibodiesagainstmic

4、rocystin—LRwerepurifiedusingafinitychromatographywithProteinG．Thepurifiedpolyclonalantibodiesweredigestedbypapainundermildconditions．TheantibodyfragmentswereseparatedbyDEAE-52ion—exchangechromatographytoretrievetheF(ab)2fragments．TheSDS—PAGEresultsshowedthatthemicro—cystin—LRpolyclon

5、alantibodieseffectivelypurifiedbyusingProteinGafinitychromatographyreleasedtheF(ab)2frag—mentsfrompapain—digestedmicrocystin—LRpolyclonalantibodies．TheyieldrateofF(ab)2fragmentswas30．6％byuV—spectrophotometer．F(ab)2fragmentsofpolyclonalantibodiesagainstMCYST—LRwereproducedsuccessfully

6、bypapainenzymolysismethod．Keywords：polyclonal—antibody；papain；ion—exchangechromatography；F(ab)2fragment多克隆抗体以其在免疫学、抗体制备工程及食品安全检测等方面的重要作用已被国际上广泛关注¨。抗体中F(ab)片段作为其主要功能及特收稿日期：2009-08-08异区已成为抗体研究的中心环节。目前抗体F基金项目：国家自然科学基金项目(30871658)；国家“973”项目(ab)片段的制备方法，主要包括胃蛋白酶和木瓜(2008CB117001)蛋白酶法。木瓜蛋白酶的

7、作用方式是在Fab与Fc作者简介：纪炜(1983一)，男，吉林集安人，硕士研究生，主要从事抗之间纵向切割，而胃蛋白酶的作用机理尚没有明确，体研制及免疫检测技术研究。(Te1)025—84390401；(E—mail)honglang970@sohu．COnl但它可以把Fc片段切割成小片段J。有报道提到通讯作者：刘贤进，(Te1)025-84390396；(E—mail)jaasliu@jaas．ac．cn胃蛋白酶作用的溶液pH值较低，容易引起抗体蛋江苏农业学报2010年第26卷第3期白变性，并且小鼠IgG1亚类对胃蛋白酶消化具有抵化效果。抗作用；而木瓜蛋白酶则对

8、F(ab)片段结合位1．