特异性小干扰RNA沉默Itch基因增强小鼠T细胞对MFC胃癌细胞的免疫杀伤作用.pdf

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1、((中国癌症杂志2014年第24卷第1o期CHINA0NCOLOGY20l4Vo1．24No．1O777特异性小干扰RNA沉默基因增强小鼠T细胞对MFC胃癌细胞的免疫杀伤作用粟英兰亚明卢义琼田国红胡烈献湖北民族学院附属民大医院急诊科，湖北恩施445000[摘要]背景与目的：Itch蛋白是一种具有调节T细胞免疫应答起始的关键分子，属于E3泛素转移酶家族，广泛参与细胞内多种信号蛋白~IJZAP70、P85、VAV、PLC—y和PKC一0等的泛素化修饰过程，在肿瘤诱导机体免疫耐受中起着重要作用。Itch通过调节T细胞表面受体活性及转移生长因子一B信号通路来介导T细胞免疫无反应性，

2、诱导外周组织Treg细胞增殖。因此，通过改变Itch蛋白表达活性有望成为一种治疗自体免疫性疾病和肿瘤的有效途径。我们利用特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA，SiRNA)沉默T细~Itch基因的表达，观察转染T细胞对小鼠MFC胃癌细胞的体外免疫杀伤作用。方法：分离615d,鼠脾脏T细胞，筛选高效特异性沉默Itch基因的SiRNA序列转染T细胞，蛋白质印迹法检测各分组Itch蛋白的表达水平；转染72h后，利用酶联免疫吸附法(enzyme一1inkedimmunosorbentassay，ELISA)检测细胞因子IL一2、INF一丫分泌情况，比较空白组、空

3、转组及转染组T细胞与小鼠MFC胃癌细胞混合培养肿瘤杀伤率。结果：转染48h后，与对照组相比，转染T细胞Itch蛋白表达率降低至16％；转染72h后，检测转染组、空转组、空白组细胞因子IL一2分泌水平分别为(1891．96±141．91)pg／mL，(1241．69±91．67)pg／mL，(1175．03±89．14)pg／mL(P<0．001)，转染组、空转组、空白组细胞因子INF一丫分泌水平分别为(958．33±75．46)pg／mL，(683．33±66．67)pg／mL，(691．72±68．72)pg／mL(P

4、，转染组T细胞能更高效地杀伤小鼠MFC胃癌细胞，最高杀瘤率达到(54．18±2．96)％。结论：利用特异性SiRNA技术沉默Itch基因能够促进小鼠T细胞因子IL一2、INF一丫分泌，增强T细胞对小鼠MFC胃癌细胞的体外免疫杀伤作用。[关键词]Itch；基因沉默；T淋巴细胞；胃肿瘤；免疫疗法DOI：10．3969／j．issn．1007—3969．2014．10．011中图分类号：R73．36；R735．2文献标志码：A文章编号：1007—3639(2014)10—0777-06SilencingitchbysmallspecificinterferingRNAenhanc

5、eimmuneactivityofmouseTlymphocytetokillMFCstomachneoplasmscells／nvitroSUYing，LANYa—ming，LUYi—qiong，TIANGuo—hong，HULie-xian(EmergencyDepartment，theAfiliatedMinDaHospitalofHubeiUniversityforNationalities，EnShiHubei445000，China)Correspondenceto：SU—YingE—mail：fly100_inthesky@163．corn[Abstract]

6、Backgroundandpurpose：ItchproteinisanestablishedregulatorofTcellimmuneresponsethresholds，belongtoaclassofE3ubiquitin—transferringenzymes，widelyinvolveintheubiquitinationofseveralkeysignalingmolecules，suchasZAP70，P85，VAV,PLC一1，，PKC一0，etc，playsacriticalroleintumorinducedimmu—nosuppression．Itc

7、hligaseactivityregulateT-cellanergyanddevelopmentofregulatoryTcellsintheperipherybymodulatingkeycomponentsofT-cellreceptorandtransforminggrowthfactor-13signaling．Therefore，manit'ulationofItchactivitiesmayprovidetheopportunitiestodevelopfuturetherapiesforimmune