应用rna干扰技术建立mmp-9基因沉默胃癌细胞克隆

《应用rna干扰技术建立mmp-9基因沉默胃癌细胞克隆》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、福建医科大学硕士研究生毕业论文学位论文原创性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的真实成果。除文中己注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名(手写)：』超导师签名(手写)：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复

2、印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权福建医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)作者签名(手写)：导师签名(手写)：纠娟年』月三一日福建医科大学硕士研究生毕业论文应用RNA干扰技术建立MMP．9基因沉默胃癌细胞克隆摘要恶性肿瘤的主要特征是浸润和转移，细胞外基质(ECM)和基底膜的降解为关键环节。基质金属蛋白酶一9(MMP一9)作为蛋白水解酶的一种，能降解基底膜和细胞外基质成分，从而促进肿瘤的浸润

3、、转移及间质血管新生。胃癌组织中MMP一9检测结果与临床病理资料对比的研究表明，该酶不仅与胃癌的分化程度、分期、病理类型、转移和预后有关，然而MMP一9基因在转录和翻译水平的抑制作用尤其是RNA干扰对胃癌的影响尚未明了。RNA干扰是FhdsRNA介导的同源mRNA降解，从而引起相应基因沉默的一种广泛存在于酵母、真菌、植物、动物体内古老的生物防御机制。1998年后，许多研究小组对RNAi的机制和应用进行了大量的研究。在应用方面主要是利用RNAi技术对线虫、果蝇、植物、动物及病毒的某些基因进行干扰，从而达到基因敲除或抑制病

4、毒复制的目的。本实验目的是应用质粒载体将基质金属蛋白酶-9(MMP-9)特异性siRNA通过脂质体转染胃癌细胞，构建了低分化胃腺癌细胞BGC823的瑚P一9基因沉默细胞模型；应用免疫荧光、westernblot、明胶酶谱分析等方法验证RNA干扰所得到的基因沉默胃癌细胞株。本实验应用分子克隆技术结合RNA干扰技术在转录和翻译水平对特定基因删P一9进行抑制，从而对该基因在胃癌浸润、转移中的作用及机制进行探讨。实验关键在于获得较高干扰效果并筛选获得成功转染质粒的细胞克隆。这将为后续的体内外胃癌模型建立提供基础。该RNA干扰模

5、型建立，从分子水平探讨胃癌细胞浸润与基质金属蛋白酶9的关系，在胃癌基因水平研究做了初步探索，结果可能对胃癌的早期诊断、预后判断和基因治疗提供参考。关键词：胃癌基质金属蛋白酶-9RNA干扰浸润转移6福建医科大学硕士研究生毕业论文EstablishmentofgastriccancercellclonewithMMP--9genesilenceusingRNAinterferenceABSTRACTThemajorcharacteristicsofmalignanttumourcellsareinvasionandmeta

6、stasis，ofwhichproteolyticdegradationoftheextracellularmatrix，includingbasementmembranebymatrixmetalloproteinases(1V[IⅣ[Ps)isoneoftheessentialevents．Asakindofmatrixmetallo—proteinases，matrixmetalloproteinase-9(MMP-9)candegradateextra-cellularmatrixandbasementmemb

7、rane，whichwouldfacilitatetheinvasion，metastasisandinterstitialangiogenesis．MMP-9isexpressedpredominantlybytumourcellsinvariouscancers．ImmunohistochemicalstudieshaveshownthattheexpressionofMMP一9correlateswithtumorinvasion，metastasisandprognosisinbothcolorectalade

8、nocarcinomaandesophagealsquamouscellcarcinoma．ButitisnotcertainwhatwillhappenwhenMMP一9isinhibittedwithRNAi．Overthelastyears，RNAinterference(RNAi)hasbeenrecognizedasam