毛尖蘑粗多糖对H22肝癌小鼠TNF-α和IL-2表达的影响.pdf

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1、HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYAug．2015，Vo1．38No．4·37·毛尖蘑粗多糖对H22肝癌小鼠TNF一和IL一2表达的影响①罗文哲，王建杰，吕冬霞(佳木斯大学基础医学院，黑龙江佳木斯154007)摘要：目的：研究毛尖蘑粗多糖对H22肝癌小鼠TNF—和IL一2表达的影响。方法：建立小鼠肝癌模型，并随机分为4组：阴性对照组、阳性对照组、毛尖蘑粗多,f~(20mg／mL)、高剂量组(40mmL)，每组lO只。于接种后24h给予不同处理，每日1次，腹腔注射。14d后，采用ELISA法测定血清中TNF一仪与IL

2、一2水平，RT—PCR对外周血单个核细胞(PBMC)TNF—Ot与IL一2mRNA表达进行检测。结果：模型对照组血清中IL一2水平低于正常对照组(P<0．05)，TNF一仪水平变化不明显，毛尖蘑粗多糖组TNF—和IL一2水平高于模型对照组(P<0．05)。PBMC中TNF—O／．和IL一2mRNA在毛尖蘑粗多糖组高于模型对照组(P<0．05)。结论：毛尖蘑粗多糖能促进TNF一和IL一2分泌而发挥了抗肿瘤作用。关键词：毛尖蘑粗多糖；肝癌；细胞因子中图分类号：R737．9文献标识码：A文章编号：1008—0104(2015)04—0037—02毛

3、尖蘑，别名金子蘑，是一种罕见的野生珍稀食分成4组，每组以不同的处理因素进行干预，一组为用真菌。在前期研究工作中，我们对毛尖蘑中的粗肿瘤对照组(对照组)：无任何干预；一组为阳性药多糖进行了提取，并发现其对H22荷瘤小鼠的肿瘤物对照组(CTX组)：给予CTX，25mg／kg·d，每日1生长有抑制作用l2]，但对免疫功能的影响尚未见次，腹腔注射；其他两组为毛尖蘑粗多糖低剂量、高报道。因此，本研究通过建立小鼠H22肝癌模型，剂量组：低剂量组给予毛尖蘑粗多糖20mg／mL，高采用ELISA、RT—PCR方法，对荷瘤小鼠外周血中剂量给予40mg／mL，腹

4、腔注射，每日1次，连续14TNF一仪与IL一2水平、以及相应的mRNA进行了d。每日观察，隔日称重。检测，以阐明毛尖蘑粗多糖如何影响H22肝癌小鼠1．2．3检测荷瘤小鼠血清TNF一仅、IL一2的水平的免疫功能，为毛尖蘑粗多糖的抗肿瘤作用提供理各组小鼠14d后，外周血采血，4℃、3，000r／论依据。min离心10rain，吸取血清，ELISA法检测各组小鼠1材料与方法血清中TNF—d和IL一2的水平，实验步骤按试剂1．1材料盒说明书操作。毛尖蘑子实体购于大兴安岭呼玛县韩家园林业1．2．4RT—PCR检测TNF—、IL一2mRNA的表达局松涛鹿

5、苑公司。环磷酰胺(CTX)为上海华氏制药应用淋巴细胞分离液分离小鼠的外周血中的有限公司天平制药厂产品。红细胞裂解液、淋巴细PBMC，调整细胞浓度至2×10。个细胞／mL，于24胞分离液购于上海新睿生物科技有限公司。TNF一孔细胞培养板中各加0．5mL的细胞悬液，在培养箱d、IL一2酶联免疫双抗体夹心(ELISA)试剂盒购于中(5％CO、37℃)培养48h。加人Trizol，按照说明深圳赛保尔生物药业有限公司。总RNA提取试剂书提取细胞的总RNA。应用一步法反转录试剂盒盒、反转录cDNA合成试剂盒购于Promega生物公转录，PCR扩增，25为

6、总反应体积。TNF—引司。Trizol试剂购于Invitrogen公司。13一actin多克物序列(460bp)：上游：5’一TGGCCCAGACCCTCA一隆抗体来自北京北京康为世纪生物科技有限公司。CA一3’，下游：5’一TGcccGGAcTccGTGAT一3’；昆明种小鼠雌性为佳木斯大学实验动物中心提供。IL一2引物序列(502bp)：上游：5、一ATGTACAG小鼠H22肝癌细胞株为哈尔滨医科大学肿瘤研究CATGCAGCTCGCATC一3、，下游：5、一GGCTYGTI"一所惠赠。GAGATGATGCmGACA一3、；B—actin序

7、列：上游：1．2方法5、一ATGGGTCAGAAGGACTCcTATGTGG一3、，下游：1．2．1毛尖蘑粗多糖提取5、一CGCCTAGAAGCACTFGCGGTG一3、0TNF一仅根据文献报道，采用热水浸提方法改良]。的反应条件为94cC变性30S，55cI=退火30s，72℃1．2．2建立小鼠肝癌模型以及药物处理延伸30S，共30个循环，72℃延伸5min。4oC终将小鼠腹水瘤以生理盐水制成肿瘤细胞悬液，止。IL一2的反应条件为94℃变性30s，57oC退火浓度5×10。个／mL，注于小鼠右前肢腋下0．2mL／45S，72oC延伸30S，

8、共30个循环，72℃延伸7rain。只，制作荷瘤鼠模型，共40只。24h后，将小鼠随机4℃终止。内参为B—actin。应用图像灰度扫描系①基金项目：佳木斯大学校级重