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1、2005年4月四川大学学报(自然科学版)Apr.2005第42卷第2期JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition)Vol.42No.2文章编号:049026756(2005)0220395205亮菌粗多糖对小鼠免疫功能的影响11221111,3高婷,白家峰,罗霞,陈东辉,徐非一,陈智,陈咏竹,孙启玲(1.四川大学生命科学院,成都610064;2.四川省中药研究所,成都610041)摘要:通过对血清溶血素值、RES吞噬功能、IL22的检测、NK细胞活性检测,研究亮菌多糖对小鼠免疫功能的影响.结果表明:亮
2、菌多糖体内给药能激活小鼠网状内皮系统,增强其吞噬功能;能明显拮抗环磷酰胺所致的小鼠溶血素抗体的降低;能提高ConA诱导小鼠体内淋巴细胞产生白介素22的能力;可以增强小鼠脾脏NK细胞的活性.说明亮菌多糖能使小鼠机体免疫力增强.关键词:亮菌多糖;吞噬;溶血素;白细胞介素22中图分类号:Q539文献标识码:A假蜜环菌[Armillariellatabescens(Scop.exFr.)Sing]属担子菌亚门,层菌纲,伞菌目口蘑科,假蜜环[1,2]菌属.生于垂死柳树上,该菌在我国最初是从发光柳树朽木中分离而得,所以形象地称为“亮菌”.亮菌是我国首次发现并拥有自主
3、知识产权的一种真菌,我国民间流传作为治疗急慢性肝炎及胆道疾患的中草[3][4]药.目前,国内外对亮菌多糖的研究仅限于其在治疗肝炎中的药理作用上,在所检索文献中至今未见有对亮菌多糖免疫作用详细研究的报道.本文主要从固体发酵的亮菌菌索中提取多糖并对其免疫作用进行了初步探讨.1实验材料1.1材料假蜜环菌[Armillariellatabescens(Scop.exFr.)Sing]购自北京中科院微生物研究所;昆明小鼠、豚鼠由四川成都中药所动物实验中心提供;BalB/C小鼠由四川大学华西校区动物实验中心提供.1.2实验方法1.2.1亮菌的发酵以玉米粉为培养基原料
4、制备培养基,按3/5的装液量分装,120℃15磅灭菌1h.灭菌冷却后行成固体培养基.无菌操作下,用接种针挑取菌丝接种后,在26～28℃温室中进行无菌培养35d.1.2.2亮菌粗多糖的提取亮菌菌索用沸水回流煮提两次,每次1h,合并两次滤液,离心除杂质.将提取液加热至50℃,加入0.3%活性碳搅拌5h脱色后,离心去活性碳.将亮菌多糖溶液浓缩至1/10,用3倍75%的乙醇沉淀,放置12h后,滤出沉淀.沉淀加少量水溶解,用酶法与Saveg法结合进行脱蛋白后,对自来水透析两昼夜,蒸馏水透析半天,再用3倍75%的乙醇沉淀,放置过夜,高速离心机取沉淀,接着用丙酮、乙醚
5、连续洗涤,得到白色的粗多糖,用苯酚2硫酸法检测多糖含量可达到70%.1.2.3对小鼠网状内皮系统(RES)吞噬功能的影响分组及给药:取小鼠40只随机平均分为4组,低、中、高3个亮菌多糖剂量组,即0.45mg/10g、0.90mg/10g、1.80mg/10g和正常对照组.试验组以0.1mL/10g灌药,每日1次,连续7d;对照组以等容积的生理盐水灌胃.末次给药后24h,于鼠尾静脉注入收稿日期:2004209228作者简介:高婷(1982-),女,四川大学生命科学学院2002级硕士研究生.3通讯作者©1994-2009ChinaAcademicJourna
6、lElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net396四川大学学报(自然科学版)第42卷稀释印度墨汁0.1mL/10g,于注入墨汁后30s及6min从小鼠眼眶后静脉丛取血0.025mL,立刻吹入0.1%Na2CO3液2mL中,于分光光度计上675nm处比色,计算吞噬指数K及吞噬系数а.剖取小鼠肝脏、脾脏称重,比较各组差异.1.2.4对小鼠溶血素抗体生成的影响免疫及给药:小鼠80只,随机分为正常对照组、Cy模型组、亮菌多糖组(0.45mg/10g、0.90mg/10g、1.80
7、mg/10g)、Cy加亮菌多糖组(0.45mg/10g、0.90mg/10g、1.80mg/10g).给药组给药剂量、方式同2.3;连续给药7d;对照组和Cy模型组均以等容积的生理盐水灌胃;Cy模型组和Cy加亮菌多糖组皮下注射Cy20mg/kg造型,每两天注射1次,连续3次;各组于第1次给药1h后腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.2mL进行免疫,7d后于眼眶静脉丛取血20μL,置1mL生理盐水中,加入4%鸡红细胞悬液0.5mL,10%豚鼠血清0.5mL,于37℃水浴中保温30min,水浴终止反应后离心,取上清液1mL加入3mL都氏溶液中,于540nm处测定各管
8、的吸收度值.1.2.5对小鼠淋巴细胞产生白介素IL22的影响取小鼠24只,分组、
