食物总抗氧能力（TAC）荧光法（ORAC）定量检测试剂盒.doc

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1、食物总抗氧化能力（TAC）荧光法（ORAC）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途食物总抗氧化能力（TAC）荧光法（ORAC）定量检测试剂是一种旨在通过使用荧光素探针，受到有机氮自由基AAPH的破坏，但在抗氧化剂的存在下，得到抑制，由此通过荧光分光光度仪，观察其峰值下降程度的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜食物样品总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superox

2、ideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯酸（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）

3、等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过氧自由基吸光能力（oxygenrad

4、icalabsorbancecapacity；ORAC），即使用荧光素（fluorescein）作为探针，2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐（2,2-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride；AAPH）作为过氧自由基供体（peroxylradicaldonor），其攻击探针，产生荧光淬灭，一旦受到抗氧化剂作用，而防止荧光消失，由此评价抗氧化潜力和活性，也就是自由基去除作用（freeradicalscavenging），在荧光分光光度仪（激发波长485nm±20，散发波长528nm±20）的帮助下，观察其峰值下

5、降程度的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。产品内容清理液（ReagentA）500毫升缓冲液（ReagentB）4毫升染色液（ReagentC）7.5毫升氧化液（ReagentD）1管标准液（ReagentE）200微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）和缓冲液（ReagentB）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证6月用户自备50毫升烧杯：用于样品操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器4℃台式离心机：用于样品操作200微升1厘米光径

6、比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析实验步骤一、样品准备1、固态食品处理1．秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封2．加入8毫升清理液（ReagentA）3．搅拌30分钟，充分混匀4．继续加入清理液（ReagentA）到终容量为10毫升5．过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒6．封口膜封口备用2、液态食品处理1．移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管2．放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g3．移取上清液到新的15毫升锥形离心管4．（选择步骤）可以加入适量的清理液（ReagentA）

7、5．（选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）6．置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存二、标准液准备1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管2．分别加入50微升缓冲液（ReagentB）到2至5号管3．移取100微升标准液（ReagentE）到1号管，混匀4．小心移取50微升1号管的标准液（ReagentE）到2号管，混匀5．小心移取50微升2号管稀释的标准液（ReagentE）到3号管，混匀6．小心移取50微升3号管稀释的标准液（ReagentE）到4号管，混匀7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号

8、缓冲液（ReagentB）标准液（ReagentE）测定体系标准Trolox浓度10100微升1微摩尔/升250微升50微升0.5微摩尔/升350微升