石蜡切片摩利（MALLORY）铁（三价）染色试剂盒产品说.doc

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1、石蜡切片摩罗利（MALLORY）铁（三价）染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途石蜡切片摩罗利（MALLORY）铁（三价）染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和氰亚铁酸盐结合反应技术，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中三价正铁离子（ferricion）沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良MALLORY方法、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的三价正铁离子检测。广泛用于血液细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。技术背景三价铁（ferric）是氧化数为三的铁。通过无机矿物酸（mineralacid）水解，三价铁从蛋白结合形态

2、中释放出来。三价铁具有难溶性的特点。通常三价铁先被还原使之与有机配位体分离，分离出来的二价铁被生物体吸收。动物和人体的整个消化道都可以吸收，植物在根尖处吸收。机体大约有三分之二的铁存在于红细胞的血红蛋白和肌肉的肌红蛋白中，20％的铁以不同形式存在于肝、脾和其他组织中。铁作为氧的载体，保证组织内氧的正常输送，在细胞生物氧化和能量代谢过程中发挥着重要作用。正常脾组织和骨髓里含有少量的三价铁。组织中过量存在三价铁，可能与血色病（hemochromatosis）和含铁血黄素沉着症（hemosiderosis）有关。使用摩罗利（MALLORY）对于皮尔斯（PERLS）方法的修正，通过酸性氰亚铁酸盐（f

3、errocyanide）与组织中三价正铁离子（ferricion）结合，成为亚铁氰化铁（ferricferrocyanide），而呈现亮蓝色色素，又称为普鲁士蓝（prussianblue）。其反应原理如下：HCl4Fe3++3K4Fe（CN）6→Fe4[（CN）]3+12K+产品内容去石蜡液（ReagentA）300毫升补水液A（ReagentB）100毫升补水液B（ReagentC）100毫升补水液C（ReagentD）100毫升补水液D（ReagentE）100毫升清理液（ReagentF）120毫升染色液（ReagentG）5毫升酸性液（ReagentH）5毫升产品说明书1份保存方式保

4、存在4℃冰箱里；染色液（ReagentG），避免光照；染色液（ReagentG）和酸性液（ReagentH）具有腐蚀性和毒性，注意操作安全；有效保证6月用户自备2毫升离心管：用于染色工作液配制的容器核固红复染试剂盒（HL40011）：用于常规染色后复染小型染色缸：用于石蜡切片的去石蜡和染色操作光学显微镜：用于组织细胞染色后观察分析实验步骤一、去石蜡处理1．取出10片待测的石蜡包埋的5微米厚的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）2．放进80℃烘箱，孵育30分钟3．室温下静置15分钟4．按下表依次放进小染色缸里孵育染色缸孵育时间50毫升去石蜡液

5、（ReagentA）15分钟50毫升去石蜡液（ReagentA）15分钟50毫升去石蜡液（ReagentA）15分钟50毫升补水液A（ReagentB）3分钟50毫升补水液B（ReagentC）3分钟50毫升补水液C（ReagentD）3分钟50毫升补水液D（ReagentE）3分钟5．小心移去切片上的补水液D（ReagentE）6．小心加上200微升清理液（ReagentF）在切片上，铺满整个切片样品表面7．室温下孵育5分钟8．小心移去切片上的清理液（ReagentF）二、样本染色处理操作开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentG）和酸性液（ReagentH）置入室温下，分别

6、移出1毫升到2.2毫升离心管，混匀后，标记为染色工作液，用锡箔纸包裹，避免光照。然后进行下列操作。1．小心加上200微升染色工作液，铺满整个切片样品表面2．室温下孵育30分钟；或直至可见篮色3．小心移去切片上的染色工作液4．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（ReagentF）中孵育2分钟1．小心移去切片上的清理液（ReagentF）三、样本复染处理1．（选择步骤）样本复染处理（核固红）2．小心加上200微升补水液B（ReagentC）在切片上，铺满整个切片样品表面3．小心移去切片上的补水液B（ReagentC）4．小心加上200微升补水液A（ReagentB）在切片上，铺满整个切片样品表

7、面5．小心移去切片上的补水液A（ReagentB）6．小心加上200微升去石蜡液（ReagentA）在切片上，铺满整个切片样品表面7．小心移去切片上的去石蜡液（ReagentA）8．放上盖玻片或封片9．即刻在一般光学显微镜下观察：三价铁沉积阳性细胞呈现亮蓝色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）注意事项1．本产品为50次操作2．本产品可以用来鉴别组织或细胞中出现黄棕色的色素是属于那一种，如是含铁血黄素