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《植物石蜡切片一步双重整体染色》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、‘,福建农学院学报,s(4)565一50019.910一r且一里ofF住‘nri一r民l11ete扛勺“赶伪植物石蜡切片一步双雷整体染色何承坤¹郑伸坤º李家慎¹(¹福建农学院园艺系º福建农学院植物教研组)摘要本文报道植物标本制片工艺中的一种新的快速整体染色法.供试的材料经不同梯度脱水,剂(乙醇一正丁醉)处理7、gh后直接用正丁醇配制的番红,固绿混合染色液干40、42℃下}亘温浸染24h左右,然后通过乙醇一正乙醇脱水3~41.浸蜡过程相应作些改进.结果表明,所用,,,.的染料能一沐性地同时进行双重染色各组织着色均匀一致红绿鲜明分色效果好该制,,,,,片法除染色时间外自材料的洗涤到浸蜡完成只需2
2、5、3oh提高了制片的效率并能节省大量的药剂.,;,关健词石蜡切片番红固绿整休双重染色O引言,,陇物常规的石蜡切片法已才合用100乡‘卜了形成了一个固定的操作程序(李正理1978;,,..cheMiks19了6,郑国铝19了8)这种常规制片法是在切片之后染色的由于多数植物材,,样经过固定液处理后其颜色与包埋剂石蜡的颜色相近因此给材料的包埋和修块带来一定困难,—,,近年来不少植物工作者对石蜡切片的染色方法进行过一些探索如爱氏苏木精的整体,;,;染色(华中农学院植物教研室1984)番红固绿的双重整体染色(容寿柏1982)一爪常规制}宁的脱水进程中同步完成了番红—固绿二重整体染色等(王承林,198
3、5).但仍,—,;有不足之处如把齐红和固绿的染色分二步进行操作上掌握较难有的采用叔丁醇为脱水,..,剂与配制染色液的溶剂而叔丁醇的凝固点仅为24。、255℃在低温时操作不便;有的还存在仅能染单色以及染色不均有分段现象等.找们在研究蔬菜作物内部结构的过程中进行丁包埋前的整体染色的尝试.切取植物的各,、、、,,器官包括根茎叶花器和果实等材料经过不同梯度的乙醇正丁醇脱水后直接.用正丁醇为溶剂配制的番红固绿混合染色剂浸染,一步就可完—成双重染色再通过乙醇,、、,,一正丁醉脱水后进行浸—蜡包埋切片采用本方法,制片效果好,周期实践证明—短,}了省原材料.现将制片流程与效果报告如下.1制片流程1.1主要试
4、剂的配制....工11混合染色剂的配制在干燥的烧杯内加2、089番红和029固绿(Fluka进口分,.,,,丈)用玻棒调匀注入1ml浓硫酸搅拌成糊状后加人10Oml正丁醇不断搅拌成紫红色染色浪即可.这种染色液可以长期使用..2脱水剂的配制脱水剂是由乙醇与正丁醇按41).个浓度梯度配制而成的(表收稿日期:1988一01一16566福;老农学院学报18卷表1脱水剂的酉己制TabT七edohydrat又公9agontDAeomPounded一(,一归..,~~一~~~~,一~-等-蒸馏水(肠’)一一乙醉(肠)正丁醇(肠)Graden住mber一Distilledwateraleooln一utano
5、l一Ethylhb脱水剂IDAI1550脱水荆亚DA亚045脱水剂lDAIO25脱水剂WDAFO、,.,l可用。5肠乙醇脱水剂l用无水乙醇05外aleoholwa。似,edintheDA丁at、dDAIab,o-¹脱水荆I.u士eaeoonthellhliDA11.2制片过程1.2.1固定FAA固定浓与洗涤材料的固定与洗涤和常规制片法相同植物的各器官采用固定.脱水前用70%乙醇洗涤3次,侮次5min...,,一122脱水与透明经洗涤后的材料在脱水剂I中停留lh脱水剂五皿各Zh;脱水剂万2~4h,其间换1~2次(依材料大小而定).··,,一3:;12染色例去脱水剂开加入混合染色剂仁清液以盖没材
6、木{为度在40、42℃的恒温箱内浸染24h左右....,、1:;24浸洗与脱水倒去染色液用正丁醇无水乙醇(l1)浸洗2次。每次60mim,然后再经正丁醇脱水2次侮次6omin.1.2.5浸蜡把材料移八10ml烧杯中,加入2~3ml正丁醉,倒人次化,蜡,直接在56~,,58℃恒温箱中浸渍sh后每隔Zh换一次净蜡共3次..、、、、,126包埋修块切片粘片脱蜡和封片与常规石州日{、1j片相同(Miksche19了6;,.,1978;李正理郑国铝1978)2效果与讨论,,从植物各个器官结构的显微照片看(版图I)各组织着色均匀一致没有出现边缘过染和中部染色不足的现象,2种染料着色红绿对比鲜明,分色效果
7、良好.在切片的粘着、.、透明和封,,脱蜡片等过程都没有出现褪色现象从显微照片看除表皮细胞(图版I一1,,,,23)染成浅绿色外几由纤维素构成壁薄的生活细胞如皮层薄壁细胞(图版I一12)、韧皮部的筛管及伴胞(图版I一8)、栅状组织、海绵组织(图版I一3)、胚乳细胞、珠被、合子胚(图版I一6)、射线薄壁细胞(图版I一1,5)、形成层(图版I一1,4)以及髓部(图版I一.4)等均被染成绿色几由次生木质化加厚壁的各种
